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產(chan) 品分類
Product Category詳細介紹
小鼠硫酸角質素（KS）定量檢測試劑盒（ELISA）
定量檢測血清、血漿、細胞培養(yang) 上清液中小鼠硫酸角質素（KS）的濃度。
使用試劑盒前，必須仔細閱讀本說明書(shu) 。
實驗原理
本試劑盒采用競爭(zheng) 法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗小鼠硫酸角質素（KS）抗體(ti) （固相抗體(ti) ）的微孔酶標板中，加入小鼠硫酸角質素（KS）校準品和待測樣本，再加入HRP標記的小鼠硫酸角質素（KS）抗原（酶標抗原），經過溫育與(yu) 充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表麵形成固相抗體(ti) -酶標抗原的免疫複合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chan) 生藍色產(chan) 物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉化為(wei) 黃色，在酶標儀(yi) 450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與(yu) 待測樣品中小鼠硫酸角質素（KS）的濃度負相關(guan) 。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中小鼠硫酸角質素（KS）的濃度。
試劑盒限製性
1、僅(jin) 供科研使用，不得用於(yu) 臨(lin) 床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內(nei) 使用，過期產(chan) 品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高於(yu) 最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋後，再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體(ti) 會(hui) 幹擾檢測結果，檢測前，請排出該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結果，與(yu) 本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
技術提示
1、混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加校準品與(yu) 樣本時，每個(ge) 校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉汙染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、使用自動洗板機時，加入一個(ge) 30秒浸泡的步驟，可以提高檢測精度。
5、底物溶液為(wei) 無色液體(ti) ，保存過程中變為(wei) 藍色，代表底物溶液已經失效，不得使用。
6、終止液加樣順序與(yu) 底物溶液加樣順序一致，加入終止液後，藍色底物產(chan) 物，會(hui) 瞬間變為(wei) 黃色。
7、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫幹燥）保存。
所有液體(ti) 組分，使用前充分搖勻，嚴(yan) 格按照說明書(shu) 標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
小鼠硫酸角質素（KS）定量檢測試劑盒（ELISA）試劑盒組分與(yu) 保存
未開封的試劑盒保存在2-8度，不得使用過期試劑盒。
標準品濃度依次為(wei) ：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL.
其他用品
1、酶標儀(yi) （450nm）
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規範的規定，嚴(yan) 格防止交叉汙染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳(chuan) 染物進行處置。
試劑盒的液體(ti) 組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與(yu) 皮膚
2、接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。
4、戴上防護手套，實驗完成後徹底洗手。
樣品的采集和儲(chu) 存
以下隻是列出樣品采集和保存的一般指南。所有樣本采集保存過程中，不得使用疊氮鈉做為(wei) 防腐劑。
1、細胞培養(yang) 上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反複凍融。
2、血清：使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在-20℃以下，避免反複凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鍾取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反複凍融。
樣本收集後，無法一次檢測完畢，請按一次用量分裝凍存，避免反複凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
4、組織勻漿：用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)衝(chong) 洗組織，去除殘留血液，稱重後將組織剪碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS(一般按1: 9的重量體(ti) 積比，比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎或反複凍融。最後將勻漿液5000×g離心 5-10分鍾，取上清檢測。
5、細胞提取液：貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗，然後用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鍾後收集細胞；懸浮細 胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每 1×106 個(ge) 細胞中加入150-200μLPBS重懸並通過反複凍融使細胞破碎(若含量很低可減少PBS的體(ti) 積)。將提取液於(yu) 1500×g離心10分鍾，取上清檢測。
6、其他生物體(ti) 液：1000×g 離心20分鍾，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
試劑準備
1、使用前，所有的組分都要至少複溫60min，確保充分複溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從(cong) 冰箱取出的濃縮洗滌液，會(hui) 有結晶產(chan) 生，這屬於(yu) 正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與(yu) 蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體(ti) 積充分混合，混合後15分鍾內(nei) 使用。
操作程序
所有試劑和組分都先恢複到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做複孔。
1、按前麵說明書(shu) 描述的方法，配製好試劑盒各種組分的工作液。
2、從(cong) 鋁箔袋中取出所需板條，剩餘(yu) 的板條用自封袋密封放回冰箱。
設置標準品孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。
3、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL。
4、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、揭開封板膜，棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複5次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在幹淨不掉屑的紙上，充分拍幹反應板。
6、將底物A和B按1:1體(ti) 積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
7、所有孔加入終止液50μL，在酶標儀(yi) 上讀取各孔吸光度（OD值）。
結果計算
1、以標準品濃度做為(wei) 橫坐標，對應的吸光度（OD值）作為(wei) 縱坐標，利用計算機軟件，采用四參數Logistic曲線擬合（4-pl），創建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。
2、如果樣品被稀釋，通過上述方法測的濃度值，要乘以稀釋倍數，才是樣品的最終濃度。
小鼠硫酸角質素（KS）定量檢測試劑盒（ELISA）試劑盒性能指標
1、物理性能
試劑盒的各液體(ti) 組分應澄清透明、無沉澱或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。
2、劑量反應曲線線性
校準品劑量反應曲線相關(guan) 係數r值，大於(yu) 等於(yu) 0.9900。
3、精密度
批內(nei) 精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個(ge) 板塊內(nei) 精度評估。批內(nei) 變異係數CV%小於(yu) 10%。
批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nei) 精度評估。批間變異係數CV%小於(yu) 15%。
4、靈敏度
最低檢出劑量小於(yu) 0.1 ng/mL。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品，進行五次在同一個(ge) 板塊內(nei) 回收率評估，回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組小鼠硫酸角質素（KS），與(yu) 結構類似物無交叉。
7、穩定性
2℃-8℃保存，有效期6個(ge) 月。
8、檢測範圍
0.25 ng/mL - 8 ng/mL
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