如何正確使用人原纖維蛋白-1酶聯免疫試劑盒

人原纖維蛋白-1（FBLN1）酶聯免疫試劑盒（ELISA）的正確使用方法，結合實驗原理與(yu) 操作規範進行說明：

‌一、實驗前準備‌

‌試劑盒組成‌

包含預包被微孔板、標準品、酶標抗體(ti) 、顯色底物（TMB）、終止液等‌。

保存條件：2-8℃避光保存，避免反複凍融‌。

‌樣本處理‌

‌血清/血漿‌：采集後室溫靜置2小時或4℃過夜，離心取上清（避免溶血）‌。

‌組織勻漿‌：用PBS衝(chong) 洗後冰上研磨，離心取上清（建議加入蛋白酶抑製劑）‌。

‌二、實驗操作流程‌

‌加樣與(yu) 孵育‌

每孔加入100μL標準品或待測樣本，37℃孵育90分鍾‌。

洗滌3次（每次拍幹後加洗滌液，靜置2分鍾）‌。

‌顯色與(yu) 終止‌

加入酶標抗體(ti) ，37℃孵育60分鍾，洗滌後加TMB顯色液避光反應15分鍾‌。

每孔加50μL終止液，顏色由藍變黃後立即讀數‌。

‌讀數與(yu) 分析‌

酶標儀(yi) 450nm波長檢測吸光度（OD值），校正波長建議570nm或630nm‌。

通過標準曲線計算樣本中FBLN1濃度‌。

‌三、關(guan) 鍵注意事項‌

‌質控要求‌

每批次實驗需設置陽性對照、陰性對照及無模板對照（NTC）‌。

板內(nei) /板間變異係數（CV）應＜5%‌。

‌汙染預防‌

分區操作（試劑準備區、樣本處理區、擴增區）‌。

使用無RNase/DNase耗材，避免交叉汙染‌。

‌四、常見問題處理‌

‌假陽性‌：檢查洗滌是否徹底或試劑是否過期‌。

‌顯色異常‌：確認顯色液避光保存及終止液添加順序‌。