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產(chan) 品分類
Product Category詳細介紹
產(chan) 品屬性：
產(chan) 品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 | Rat Interleukin 4, IL-4 Elisa Kit | 48T/96T | GOY-2873E |
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠白介素4(IL-4)水平。用純化的大鼠白介素4(IL-4)抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠白介素4(IL-4)，再與(yu) HRP標記的大鼠白介素4(IL-4)抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠白介素4(IL-4)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠白介素4(IL-4)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（80pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書(shu) | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(ge) |
試劑配製：
1、酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍幹品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、標記抗體(ti) 稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親(qin) 和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、標記抗體(ti) （Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親(qin) 和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
40pg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
20pg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
10pg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
5pg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2.5pg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鍾.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。
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