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產(chan) 品名稱：人脈絡膜黑色素細胞
貨號：GOY-01X1372
分類：原代細胞
2.組織來源：脈絡膜組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：人脈絡膜黑色素細胞分離自眼球脈絡膜組織；脈絡膜在視網膜和鞏膜之間，含有豐(feng) 富血管和色素細胞，對外力衝(chong) 擊的耐受性較視網膜差，當眼球受到從(cong) 前麵來的外力的衝(chong) 擊作用通過玻璃體(ti) 傳(chuan) 到後極部時，堅硬的鞏膜在其外麵又有抵抗作用，使脈絡膜在內(nei) 外兩(liang) 種作用夾攻下而發生破裂和出血。脈絡膜呈暗褐色，圍繞視神經乳頭部有照膜，為(wei) 青綠色帶金屬光澤的三角形區。脈絡膜是眼球中膜的後2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網膜之間，續連於(yu) 睫狀體(ti) 後方。脈絡膜的血循環營養(yang) 視網膜外層，其含有的豐(feng) 富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yang) 視網膜外層及玻璃體(ti) ，並有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺係統起保護作用，對整個(ge) 視覺神經有調節作用。續連於(yu) 睫狀體(ti) 後方，含豐(feng) 富的血管和色素細胞，有營養(yang) 和遮光作用。
5.方法簡介：公司實驗室分離的人脈絡膜黑色素細胞先用消化、後-膠原酶混合消化結合專(zhuan) 用培養(yang) 基篩選法製備而來，細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的人脈絡膜黑色素細胞經Dopa染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息： 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次； 生長特性 貼壁 細胞形態 長梭形 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 1-2代 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
人脈絡膜黑色素細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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