上皮細胞的分離提取與培養

以分離培養(yang) SD大鼠腎小管上皮細胞為(wei) 例，操作步驟如下：

1、材料準備

SD大鼠（4-6周齡）2-3隻、PBS、膠原酶Ⅰ、上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基、鼠尾膠原蛋白預包被培養(yang) 皿、細胞篩（80目、150目）、離心管等。

2、動物處理與(yu) 腎組織獲取

斷頸處死大鼠，75%乙醇浸泡5 min後移入超淨台。剪開腹腔取出完整腎髒，置於(yu) 含PBS的玻璃皿中。

3、腎皮質組織分離

剝除腎包膜後，從(cong) 腎正中縱切，可見皮質與(yu) 髓質界限明顯。用顯微剪剪取腎皮質組織。

4、組織剪碎與(yu) 初步過濾

將腎皮質組織剪成約1 mm3小塊，放於(yu) 80目細胞篩上，使用注射器柱塞輕輕研磨，並用PBS衝(chong) 洗，收集濾液。

5、進一步篩選腎小管組織

濾液依次通過80目與(yu) 150目篩網，腎小管結構多聚集於(yu) 150目篩網表麵（如圖1）。

6、腎小管收集與(yu) 消化

反轉150目篩，用含2% FBS的PBS衝(chong) 洗腎小管組織，收集濾液，1200 rpm離心5 min後，加入0.1%膠原酶Ⅰ，在37℃水浴中消化15-30 min。

7、終止消化與(yu) 細胞重懸

加入PBS稀釋終止消化，輕柔吹打至液體(ti) 混濁，再次離心並用PBS洗滌一次。

8、接種與(yu) 培養(yang)

用預熱的上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基重懸細胞沉澱，接種於(yu) 預先用鼠尾膠原蛋白包被的培養(yang) 皿。培養(yang) 24-48 h後觀察細胞貼壁情況，換液後可見典型“鋪路石”樣上皮細胞形態