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產(chan) 品名稱:人牙周膜幹細胞
貨號:GOY-01X1357
分類:原代細胞
2.組織來源:牙周膜組織
3.產(chan) 品規格:5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介:人牙周膜幹細胞分離自牙周膜組織;牙周膜(牙周韌帶、牙周間隙)是由致密結締組織所構成。多數纖維排列成束,纖維的一端埋於(yu) 牙骨質內(nei) ,另一端則埋於(yu) 牙槽窩骨壁裏,使牙齒固位於(yu) 牙槽窩內(nei) ;牙周膜內(nei) 有神經、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞(Fibroblast)是疏鬆結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。間充質幹細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)來源於(yu) 胚胎時期的中胚層組織,具有很強的自我複製和多向分化潛能,具有向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞及肌細胞等多種終末細胞定向分化的能力,運用 MSCs來修複軟骨損傷(shang) 具有很好的應用前景,目前已能夠從(cong) 骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和製備間充質幹細胞。牙周膜幹細胞參與(yu) 了牙周組織的病變、修複及再生過程。現在,利用牙周膜幹細胞建立體(ti) 外模型,已經成為(wei) 有關(guan) 員研究牙周組織疾病的重要手段。
5.方法簡介:公司實驗室分離的人牙周膜幹細胞采用膠原酶消化結合差速貼壁法製備而來,細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測:公司實驗室分離的人牙周膜幹細胞經CD44免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息: 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 成纖維細胞樣 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 3-5代左右 培養(yang) 條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yang) 操作:

人牙周膜幹細胞1)複蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yang) 基,培養(yang) 過夜)。第二天換液並 檢查細胞密度。
2)細胞傳(chuan) 代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於(yu) 培養(yang) 瓶中,置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基,輕輕打勻後吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yang) 基後,PBS 清洗一遍後加入 1ml ,細胞變圓 脫 落後,加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為(wei) 10%,細胞密度不低於(yu) 1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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