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產(chan) 品名稱：大鼠口腔粘膜成纖維細胞
貨號：GOY-01X1348
分類：原代細胞
2.組織來源：口腔黏膜組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：大鼠口腔粘膜成纖維細胞分離自口腔粘膜組織；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂與(yu) 外界相通，後經咽峽與(yu) 咽相續。口腔內(nei) 有牙、舌等器官。口腔的前壁為(wei) 唇、側(ce) 壁為(wei) 頰、頂為(wei) 齶、口腔底為(wei) 黏膜和肌等結構。口腔借上、下牙弓分為(wei) 前外側(ce) 部的口腔前庭（oral vestibule）和後內(nei) 側(ce) 部的固有口腔（oral cavity proper）；當上、下頜牙咬合時，口腔前庭與(yu) 固有口腔之間可借第三磨牙後方的間隙相通。成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為(wei) 突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮於(yu) 培養(yang) 基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽(wei) 足，表現為(wei) 小的突起；6h後細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體(ti) 較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，並彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
5.方法簡介：公司實驗室分離的大鼠口腔粘膜成纖維細胞采用-膠原酶混合酶消化後差速貼壁製備而來，細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的大鼠口腔粘膜成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息： 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 成纖維細胞樣 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 3代左右 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
大鼠口腔粘膜成纖維細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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