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產(chan) 品名稱：小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞
貨號：GOY-01X0686
規格：5×10⁵Cells/T25培養(yang) 瓶
分類：原代細胞
2.組織來源：肺組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反複分枝成無數細支氣管，它們(men) 的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為(wei) 肺泡。小肺泡細胞，又稱I型肺泡細胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細胞，又稱Ⅱ型肺泡細胞，分泌表麵活性物質（二棕櫚酰），以降低肺泡表麵張力。Ⅱ型肺泡細胞位於(yu) Ⅰ型肺泡細胞之間，數量較Ⅰ型肺泡細胞多，但覆蓋麵積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形，胞質著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細胞遊離而有少量微絨毛，胞質內(nei) 富含線粒體(ti) 和溶酶體(ti) ，有較發達的粗麵內(nei) 質網和高爾基複合體(ti) 。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nei) 含有平行排列的板層狀結構，稱為(wei) 嗜餓性板層小體(ti) 。小體(ti) 內(nei) 的主要成分為(wei) 磷脂，以二棕櫚酰為(wei) 主，此外還有糖胺多糖及蛋白質等。顆粒內(nei) 物質釋放出來後，在肺泡表麵形成一層粘液層，稱為(wei) 表麵活性物質（surfactant）。表麵活性物質有降低肺泡表麵張力、穩定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小，表麵活性物質密度增加，表麵張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時肺泡擴張，表麵活性物質密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表麵活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表麵活性物質缺乏；吸入毒氣可直接破壞表麵活性物質。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖並分化為(wei) Ⅰ型肺泡細胞的潛能，故具有修複受損傷(shang) 上皮的作用。
5.方法簡介：公司實驗室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞采用彈性灌注消化法結合差速貼壁法，並通過上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞經SP-C免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息：包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 上皮細胞樣 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 1-2代 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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