豬膀胱平滑肌細胞操作方法

豬膀胱平滑肌細胞操作方法：

組織塊直接培養(yang) 法（原代細胞培養(yang) 實驗）

材料與(yu) 儀(yi) 器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從(cong) 這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(ge) 【實驗材料】每組的超淨台中有以下物品：1.50ml配製好的RPMI1640培養(yang) 液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(ge) ；3、50ml離心筒2個(ge) 4、滅菌培養(yang) 皿1個(ge) ，細胞培養(yang) 瓶1個(ge) 5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(ge) ；無菌玻璃攪拌棒1個(ge) 6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1台；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉(cang) 鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個(ge) 胚胎轉移至一個(ge) 小的無菌培養(yang) 皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態下，將絞碎的胚胎轉移於(yu) 一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環境中或置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中輕輕搖動15分鍾。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體(ti) 轉移至一無菌50ml的離心管中，該管內(nei) 按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)於(yu) 含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重複步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鍾，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉澱的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反複洗滌細胞直至上清清亮為(wei) 止。