如何優化ELISA檢測中的洗刷步驟？

‌ELISA檢測洗刷步驟優(you) 化方案‌

‌一、洗液配製優(you) 化‌

‌洗滌劑選擇‌

推薦使用0.05%-0.1% Tween-20的PBS緩衝(chong) 液（pH 7.2-7.4），平衡去汙能力與(yu) 抗原保護‌。

高濃度Tween-20（>0.1%）可能破壞抗原-抗體(ti) 複合物，導致假陰性；濃度過低（<0.05%）則無法有效去除非特異性結合。

‌現配現用‌

洗液保存超過24小時可能導致Tween-20分層或微生物汙染，建議4℃密封保存並於(yu) 當日使用。

‌二、洗刷方法選擇‌

‌自動化洗板機‌

優(you) 先選擇浮動式洗板機，其吸頭可自由移動，適用於(yu) U型/V型底孔板，確保清洗均勻性‌。

關(guan) 鍵參數設置：

洗液量：300-350μL/孔（補償(chang) 邊緣蒸發損失）‌

抽吸壓力：-400mbar避免殘留

拍幹力度：3-5級可調‌

‌手工洗板‌

使用多道移液器（8道或12道），采用後向抽吸法，避免槍頭觸碰孔壁‌。

每孔洗液量300μL，浸泡30-60秒後拍幹5次，及時更換吸水紙防止汙染‌。

三、質量控製‌

每批次插入空白對照、低值/高值質控品，監控背景信號與(yu) 回收率‌。

使用LIMS係統記錄洗板機運行日誌與(yu) 操作人員信息，確保可追溯性。

四、特殊樣本處理‌

‌高血脂/高蛋白樣本‌：增加洗滌次數至5-7次，或添加0.1% Triton X-100增強去汙‌。

‌低豐(feng) 度靶標‌：減少洗滌次數至3次，縮短浸泡時間以避免信號丟(diu) 失。

通過上述優(you) 化，可將批間變異率控製在5%以下，顯著提升檢測信噪比‌。