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單核細胞型淋巴瘤細胞具體(ti) 操作
取出凍存管: 根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
從(cong) 液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
初學者易犯錯誤:水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
水浴鍋內(nei) 凍存管太多,導致傳(chuan) 熱不佳,使融化時間延長。
離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟(diu) 失。
一次複蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉汙染。
實驗前準備:將水浴鍋預熱至37℃
單核細胞型淋巴瘤細胞用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超淨工作台台麵。
在超淨工作台中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yang) 瓶 等。
迅速解凍:
迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,並要不斷的搖動,使管中的液體(ti) 迅速融化。
.約-2min後
凍存管內(nei) 液體(ti) *溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超淨台內(nei) 。
平衡離心:用架盤天平平衡後,放入離心機中3000r/min 離心3min
製備細胞懸液:吸棄上清液。
向離心管內(nei) 加入0ml培養(yang) 液,吹打製成細胞懸液。
活化與(yu) 細胞複蘇 收到細胞株包裹時, 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yang) , 或立即冷凍保存(置於(yu) –70 °C, 隔夜後, 移到liq N2)。
細胞複蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-96℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
細胞計數:細胞濃度以5×05/ml為(wei) 宜。
培養(yang) 細胞將複合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養(yang) 瓶內(nei) ,將培養(yang) 瓶放入37℃和5%CO2的培養(yang) 箱內(nei) 2-4小時(或者24-48小時)後換液繼續培養(yang) 培養(yang) ,換液的時間由細胞情況而定。
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