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產(chan) 品名稱：小鼠胚胎幹細胞
貨號：GOY-01X1408
分類：原代細胞
2.組織來源：囊胚
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：小鼠胚胎幹細胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎幹細胞（Embryonic stem cell，ESCs，簡稱ES、EK或ESC細胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細胞，它具有體(ti) 外培養(yang) 無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體(ti) 外還是體(ti) 內(nei) 環境，ES細胞都能被誘導分化為(wei) 機體(ti) 幾乎所有的細胞類型。進一步說，胚胎幹細胞（ES細胞）是一種高度未分化細胞。它具有發育的全能性，能分化出成體(ti) 動物的所有組織和器官，包括生殖細胞。ES細胞具有與(yu) 早期胚胎細胞相似的形態結構，細胞核大，有一個(ge) 或幾個(ge) 核仁，胞核中多為(wei) 常染色質，胞質胞漿少，結構簡單。體(ti) 外培養(yang) 時，細胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細胞呈淡黃色。細胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細胞彼此界限不清，細胞表麵有折光較強的脂狀小滴。細胞克隆形態多樣，多數呈島狀或巢狀。小鼠ES細胞的直徑7 微米～18 微米，豬、牛、羊ES細胞的顏色較深，直徑12 微米～18微米。胚胎幹細胞與(yu) 普通細胞有顯著差別，有其特定的生長特性和特定的標誌，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表麵抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎幹細胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標誌，這些特性和標誌均可以用於(yu) 對胚胎幹細胞進行鑒定，除此之外，胚胎幹細胞還可以在體(ti) 外永久傳(chuan) 代，並保持正常核型。在體(ti) 外培養(yang) 體(ti) 係中加入分化抑製劑如白血病抑製因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yang) 層（MEF）上培養(yang) 時，胚胎幹細胞都能呈克隆性增殖，長期保持核型正常和穩定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎幹細胞還表現岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與(yu) 細胞衰老密切相關(guan) ，多數成熟細胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎幹細胞與(yu) 成熟細胞不同的重要特點，也可能是其複製生命期限遠比體(ti) 細胞長的原因。
5.方法簡介：公司實驗室分離的小鼠胚胎幹細胞采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特製專(zhuan) 用培養(yang) 基篩選培養(yang) ，消化傳(chuan) 代純化製備而來，細胞總量約為(wei) 5×105cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的小鼠胚胎幹細胞經Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息：包被條件 明膠（0.1%） 培養(yang) 基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次； 生長特性 貼壁 細胞形態 短梭形、多角形 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 5-8代左右 消化液 0.025% 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
小鼠胚胎幹細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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