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產(chan) 品名稱：大鼠脊髓神經幹細胞
貨號：GOY-01X1407
分類：原代細胞
2.組織來源：脊髓組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：大鼠脊髓神經幹細胞分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經結構，位於(yu) 脊柱的椎管內(nei) 且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經係統延伸部分。中樞神經係統的細胞依靠複雜的聯係來處理傳(chuan) 遞信息。脊髓的主要功能是傳(chuan) 送腦與(yu) 外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經係統的一部分，在椎管裏麵，上端連接延髓，兩(liang) 旁發出成對的神經，分布到四肢、體(ti) 壁和內(nei) 髒。脊髓的內(nei) 部有一個(ge) H形（蝴蝶型）灰質區，主要由神經細胞構成；在灰質區周圍為(wei) 白質區，主要由有髓神經纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩(liang) 旁發出許多成對的神經（稱為(wei) 脊神經）分布到全身皮膚、肌肉和內(nei) 髒器官。脊髓是周圍神經與(yu) 腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為(wei) 相應的31節，31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經幹細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞，它可以通過不對等的分裂方式產(chan) 生神經組織的各類細胞。需要強調的是，在腦脊髓等所有神經組織中，不同的神經幹細胞類型產(chan) 生的子代細胞種類不同，分布也不同。神經幹細胞作為(wei) 幹細胞的一種，它具有其它所有幹細胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為(wei) 本係統大部分類型細胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生，對損傷(shang) 和疾病具有反應能力。神經幹細胞在疾病、損傷(shang) 狀態下具有增殖、遷移，並向神經細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力，已成為(wei) 神經係統損傷(shang) 修複和再生研究的熱點，體(ti) 外建立穩定的神經幹細胞培養(yang) 模型是其基礎和臨(lin) 床應用的前提。神經幹細胞在培養(yang) 3-4d後，可形成神經球，神經球在培養(yang) 基中呈懸浮生長。
5.方法簡介：公司實驗室分離的大鼠脊髓神經幹細胞采用消化後差速貼壁，結合神經幹細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的大鼠脊髓神經幹細胞經Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息： 培養(yang) 基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 懸浮 細胞形態 球形 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 2-3代，Accutase 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
大鼠脊髓神經幹細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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