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產(chan) 品分類
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產(chan) 品名稱：小鼠浦肯野細胞
貨號：GOY-01X1406
分類：原代細胞
2.組織來源：小腦組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：小鼠浦肯野細胞分離自小腦皮質組織；小腦的表麵被覆著一層灰質，叫小腦皮質，小腦皮質分為(wei) 3層，從(cong) 表及裏分別為(wei) 分子層、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質裏含有星狀細胞、籃狀細胞、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經元。浦肯野細胞發出的軸突組成小腦皮質的傳(chuan) 出纖維，終止於(yu) 小腦白質內(nei) 的神經核。浦肯野細胞（Purkinje cell）是從(cong) 小腦皮質發出的能夠傳(chuan) 出衝(chong) 動的神經元。人的小腦皮質約有1500萬(wan) 個(ge) 浦肯野細胞。浦肯野細胞還廣泛分布於(yu) 心室。顯著的電生理特點是傳(chuan) 導性強，傳(chuan) 導速度快，可達4000mm/s。屬快反應自律型細胞，具有舒張期自動除極化的性能，因而有自律性，但自律性強度明顯低於(yu) 竇房結P細胞。這類細胞常常平行排列，細胞內(nei) 電阻低，隻有心室細胞的1/3。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質中的神經元，細胞體(ti) 呈梨形，頂端發出2~3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與(yu) 小腦葉片長軸垂直的平麵上。樹突分支上有大量的樹突棘，與(yu) 傳(chuan) 入纖維構成廣泛的突觸聯係，接受傳(chuan) 入小腦的全部信息。軸突由細胞底部（與(yu) 主樹突相對方向）發出，細長，離開胞體(ti) 不遠便形成有髓神經纖維，向內(nei) 經顆粒層離開皮質進入白質，組成小腦皮質的傳(chuan) 出纖維，終止於(yu) 小腦內(nei) 部的神經核團。一個(ge) 浦肯野細胞的軸突約形成500個(ge) 終末膨大，約與(yu) 小腦深部核團的35個(ge) 神經元形成突觸。心髒浦肯野細胞常常平行排列，幾個(ge) 細胞互相以漿膜連接排成一個(ge) 小束，小束外包繞著基底膜。細胞內(nei) 含肌原纖維很少，胞漿區內(nei) 充滿糖原顆粒、線粒體(ti) 和肌漿網，細胞內(nei) 電阻低，隻有心室細胞的1/3。浦肯野細胞內(nei) 無橫管係統，但膜電容比收縮細胞大，可能是由於(yu) 其閏盤結構廣泛而複雜，提供了較大的表麵積的緣故。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構成浦肯野細胞傳(chuan) 導快的形態學基礎。
5.方法簡介：公司實驗室分離的小鼠浦肯野細胞采用消化法結合神經元專(zhuan) 用培養(yang) 基、化學試劑抑製法篩選製備而來，細胞總量約為(wei) 5×105cells/瓶
6.質量檢測：公司實驗室分離的小鼠浦肯野細胞經Neph3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息：包被條件 PLL（0.1mg/ml） 培養(yang) 基 含脂質濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 神經元細胞樣 傳(chuan) 代特性 不增殖；不傳(chuan) 代 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
小鼠浦肯野細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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