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產(chan) 品名稱：小鼠骨髓造血幹細胞
貨號：GOY-01X1398
分類：原代細胞
2.組織來源：骨髓組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：小鼠骨髓造血幹細胞分離自骨髓；骨髓是機體(ti) 的造血組織，位於(yu) 身體(ti) 的許多骨骼內(nei) 。成年動物的骨髓分兩(liang) 種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能製造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與(yu) 抑製各種病原體(ti) ，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能製造抗體(ti) 。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在於(yu) 長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀鬆骨質間的網眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chan) 生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為(wei) 紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，後幾乎隻有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。造血幹細胞具有自我更新能力並能分化為(wei) 各種血細胞的前提細胞，終生成各種血細胞成分，包括紅細胞，白細胞和血小板。造血幹細胞需要根據機體(ti) 的生理需求適時的補充血液係統各個(ge) 成熟細胞組分。同時在損傷(shang) 、炎症等應激狀態下，造血幹細胞也扮演著調節和維持體(ti) 內(nei) 血液係統各個(ge) 細胞組分的生理平衡的角色。臨(lin) 床治療中，造血幹細胞移植廣泛應用於(yu) 血液係統疾病以及自身免疫疾病，在其它實體(ti) 瘤的治療中，比如淋巴瘤，生殖細胞瘤，乳腺癌，小細胞肺癌，主要應用於(yu) 常規治療失敗或複發難治以及具有不良預後因素的患者。
5.方法簡介：公司實驗室分離的小鼠骨髓造血幹細胞采用衝(chong) 洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結合培養(yang) 基篩選製備而來，細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的小鼠骨髓造血幹細胞經CD34、Sca-1免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息： 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 懸浮 細胞形態 圓形 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 3代左右 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
小鼠骨髓造血幹細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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