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產(chan) 品分類
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產(chan) 品名稱：小鼠神經少突膠質前體(ti) 細胞
貨號：GOY-01X1396
分類：原代細胞
2.組織來源：腦組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：小鼠神經少突膠質前體(ti) 細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩(liang) 個(ge) 半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個(ge) 大腦半球的大部分，它是神經元胞體(ti) 集中的地方。內(nei) 部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布於(yu) 中樞神經係統，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為(wei) 少突膠質細胞或寡突膠質細胞。少突膠質細胞（oligodendrocyte）是中樞神經係統（CNS）的成髓鞘神經膠質細胞，其發育要經曆少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為(wei) 三型。但是，細胞發育是一個(ge) 連續的過程，其形態、表達產(chan) 物和功能的演變沒有嚴(yan) 格的界限，因此，其分類是相對的。這三型分別為(wei) ：Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細胞呈圓形，表麵光滑，直徑約3μm，體(ti) 外混合培養(yang) 時成簇生長在星形膠質表麵，具有很強的分裂增殖潛力，表達GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子（polysialic acid-neural
cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質細胞胞體(ti) 常有雙極或三極突起，極少數為(wei) 單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體(ti) 外培養(yang) 時為(wei) 雙潛能細胞，既可分化為(wei) 少突膠質細胞又可分化為(wei) Ⅱ型星形膠質，故又稱為(wei) 少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte
progenitor cell，O2A）。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chan) 生GQ的抗體(ti) ），故常用A2B5抗體(ti) 標記O2A。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力，為(wei) 分裂終期細胞。直徑約10μm。根據其形成髓鞘的能力，又分為(wei) 不成熟的和成熟的兩(liang) 類少突膠質細胞。不成熟的OL胞體(ti) 常伸出4～5條較粗大突起，表麵還殘留有A2B5標記物，同時也表達O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對軸突髓鞘化的能力。體(ti) 外培養(yang) 的少突膠質細胞前體(ti) 細胞（簡稱少突膠質細胞前體(ti) 細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞，前兩(liang) 者具有增殖能力。
5.方法簡介：公司實驗室分離的小鼠神經少突膠質細胞采用消化、混合細胞營養(yang) 缺失培養(yang) 、搖床振蕩結合差速貼壁法並通過專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，細胞總量約為(wei) 5×105cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的小鼠神經少突膠質前體(ti) 細胞經A2B5免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息：包被條件 PLL（0.1mg/ml） 培養(yang) 基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2天半量換液1次 生長特性 貼壁 細胞形態 雙極、多極形 傳(chuan) 代特性 不傳(chuan) 代，不增值，存活1-2周 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
小鼠神經少突膠質前體(ti) 細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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