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產(chan) 品名稱：兔視網膜色素上皮細胞
貨號：GOY-01X0689
規格：5×10⁵Cells/T25培養(yang) 瓶
分類：原代細胞
2.組織來源：視網膜組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：兔視網膜色素上皮細胞分離自視網膜組織；視網膜居於(yu) 眼球壁的內(nei) 層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩(liang) 層間在病理情況下可分開，稱為(wei) 視網膜脫離。色素上皮層與(yu) 脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們(men) 具有支持和營養(yang) 光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修複等作用。組織學上視網膜分為(wei) 10層，由外向內(nei) 分別為(wei) ：色素上皮層、視錐、視杆細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢(cong) 狀層、內(nei) 顆粒層、內(nei) 叢(cong) 狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內(nei) 界膜。視網膜內(nei) 層為(wei) 襯於(yu) 血管膜內(nei) 麵的一層薄膜，有感光作用；後部鼻側(ce) 有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個(ge) 神經元組成。神經元是視細胞層，專(zhuan) 司感光，它包括錐細胞和杆細胞。視杆細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個(ge) 視細胞通過雙節細胞與(yu) 一個(ge) 神經節細胞相聯係，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專(zhuan) 管傳(chuan) 導。視網膜是一層菲薄的但又非常複雜的結構，它貼於(yu) 眼球的後壁部，傳(chuan) 遞來自視網膜感受器衝(chong) 動的神經纖維跨越視網膜表麵，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力強。視網膜色素上皮（RPE）位於(yu) 脈絡膜和光感受器細胞外節之間，是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yang) 物質和代謝終產(chan) 物轉運通道；主要是由單層色素上皮細胞所構成，排列十分規則。視網膜色素上皮參與(yu) 循環，吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興(xing) 奮性，並分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內(nei) 皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。細胞呈多角形，細胞分為(wei) 三部分，即頂部、體(ti) 部和基底部。視網膜色素上皮細胞無再生能力，細胞死亡後不被替換，而是鄰近的細胞向側(ce) 麵滑動，以死亡細胞遺留下來的空間。視網膜色素上皮位於(yu) 脈絡膜和光感受器細胞外節之間，是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yang) 物質和代謝終產(chan) 物轉運通道。視網膜色素上皮參與(yu) 循環，吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興(xing) 奮性，並分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內(nei) 皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。
5.方法簡介：公司實驗室分離的兔視網膜色素上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，並通過上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的兔視網膜色素上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息：包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 上皮細胞樣 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 2-3代 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
兔視網膜色素上皮細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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