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產(chan) 品名稱：兔關(guan) 節軟骨細胞
貨號：GOY-01X0683
規格：5×10⁵Cells/T25培養(yang) 瓶
分類：原代細胞
2.組織來源：關(guan) 節軟骨組織
3.產(chan) 品規格：5×105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
4.細胞簡介：兔關(guan) 節軟骨細胞分離自關(guan) 節軟骨組織；關(guan) 節軟骨屬於(yu) 透明軟骨，表麵光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結締組織的膠原纖維構成的基本框架，這種框架呈半環形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下麵的骨質上，上端朝向關(guan) 節麵，這種結構使關(guan) 節軟骨緊緊與(yu) 骨結合起來而不會(hui) 掉下來，同時當受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩衝(chong) 壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關(guan) 節軟骨的正常代謝。關(guan) 節軟骨沒有神經支配，也沒有血管，其營養(yang) 成分必須從(cong) 關(guan) 節液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guan) 節液中，關(guan) 節軟骨的這種營養(yang) 代謝必須通過關(guan) 節運動，使關(guan) 節軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guan) 節運動對於(yu) 維持關(guan) 節軟骨的正常結構起重要的作用。關(guan) 節軟骨細胞位於(yu) 關(guan) 節軟骨陷窩內(nei) 。幼稚的關(guan) 節軟骨細胞位於(yu) 關(guan) 節軟骨組織的表層，單個(ge) 分布、體(ti) 積較小、呈橢圓形，長軸與(yu) 關(guan) 節軟骨表麵平行，越向深層的關(guan) 節軟骨細胞體(ti) 積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關(guan) 節軟骨細胞多2-8個(ge) 成群分布於(yu) 關(guan) 節軟骨陷窩內(nei) ，這些關(guan) 節軟骨細胞由同一個(ge) 母細胞分裂增殖而成，稱為(wei) 同源細胞群。電鏡下，關(guan) 節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內(nei) 有大量的粗麵內(nei) 質網和發達的高爾基複合體(ti) 及少量的線粒體(ti) 。在組織切片中，關(guan) 節軟骨細胞收縮為(wei) 不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體(ti) 外培養(yang) 的關(guan) 節軟骨細胞對於(yu) 研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義(yi) 。
5.方法簡介：公司實驗室分離的兔關(guan) 節軟骨細胞采用膠原酶聯合中性蛋白酶消化製備而來，細胞總量約為(wei) 5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的兔關(guan) 節軟骨細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yang) 信息： 培養(yang) 基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每3-4天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 梭形、多角形 傳(chuan) 代特性 可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態佳 培養(yang) 條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yang) 操作：
兔關(guan) 節軟骨細胞1）複蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yang) 基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培 養(yang) 過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並 檢查細胞密度。
2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培 養(yang) 箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下麵 T25 瓶為(wei) 類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS 清洗一遍後加入 1ml ，細胞變圓 脫 落後，加入 1ml 含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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