本僅(jin) 供研究使用。

檢測範圍：96T

5pg/ml-60pg/ml

使用目的：

本用於(yu) 測定大鼠血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中血管內(nei) 皮生長因子 （VEGF）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠血管內(nei) 皮生長因子 （VEGF）水平。用純化的大鼠血管內(nei) 皮生長因子 （VEGF）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nei) 皮生長因子（VEGF），再與(yu) HRP標記的血管內(nei) 皮生長因子 （VEGF）抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nei) 皮生長因子 （VEGF）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠血管內(nei) 皮生長因子 （VEGF）濃度。

組成

操作步驟

.         標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.         溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。  

4.         配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鍾.

0.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後5分鍾以內(nei) 進行。

計算

  以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。

注意事項

．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在5分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於(yu) 標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

0. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。