改良大鼠心髒微血管內皮細胞的培養方法及鑒定

改良大鼠心髒微血管內(nei) 皮細胞的培養(yang) 方法及鑒定

     目的 建立一種分離大鼠心髒微血管內(nei) 皮細胞的方法.方法 雄性SD大鼠2隻,快速取出心髒,去除左室外約1/4層,將剩餘(yu) 心肌組織剪碎至1 mm³大小，用0.1%Ⅱ型膠原酶在37℃水浴中消化20分鍾。消化後的組織懸液經200目不鏽鋼篩網過濾，濾液以1000 r/min離心5分鍾，棄上清後加入含20%胎牛血清的DMEM培養(yang) 基重懸細胞。采用差速貼壁法純化內(nei) 皮細胞，將細胞懸液接種於(yu) 預先包被纖維連接蛋白的培養(yang) 瓶中，37℃、5% CO₂條件下培養(yang) 30分鍾後，轉移未貼壁細胞至新的包被培養(yang) 瓶繼續培養(yang) 。

    24小時後可見細胞呈鵝卵石樣鋪展，免疫熒光檢測顯示約90%細胞呈CD31陽性，Ⅷ因子相關(guan) 抗原染色陽性率達85%。透射電鏡下觀察到特征性Weibel-Palade小體(ti) ，證實成功分離出微血管內(nei) 皮細胞。與(yu) 常規方法相比，本改良法獲得的細胞存活率提高至（92.3±3.7）%，且保持血管形成能力達7代以上。

    該方法通過優(you) 化組織處理步驟和純化條件，顯著提高了原代細胞的得率和純度。後續實驗證實，培養(yang) 的細胞對血管內(nei) 皮生長因子表現出劑量依賴性增殖反應，低密度脂蛋白攝取實驗陽性，符合內(nei) 皮細胞功能特征。這種穩定高效的分離培養(yang) 體(ti) 係，為(wei) 心血管疾病機製研究和藥物篩選提供了可靠的細胞模型。