ELISA法手工測定影響結果的因素有哪些

     ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重複性好的特點，並具有操作簡便、無放射性危害的優(you) 點，因而多年來廣泛應用於(yu) 血站和醫院的實驗室中，但在測定中常會(hui) 出現一些誤差和問題。我們(men) 通過幾年的實驗觀察，認為(wei) 影響結果的因素有如下方麵。

1  試劑盒

        （1）抗原、抗體(ti) 活性對效價(jia) 的影響：主要是試劑中抗體(ti) （或抗原）的效價(jia) 降低或失活，結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質的反應靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性。

       （2）酶結合物濃度過高，也會(hui) 導致OD值假性增高。

2  試驗儀(yi) 器

      （1）加樣器是否經過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精確，會(hui) 使結果忽高忽低。

      （2）每次洗板前，應檢查洗板機針孔有無堵塞。

3  操作

    （1）檢測前先將試劑盒從(cong) 冰箱取出置室溫平衡20min後使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結果假性降低。

    （2）加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷(shang) 包被物使抗體(ti) （抗原）脫落而影響實驗結果的準確性。

    （3）洗滌不充分，會(hui) 使結果假性增高，過分洗滌呈假陰性。

    （4）比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從(cong) 37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應將板底擦幹後進行比色，水汽或孔內(nei) 氣泡也會(hui) 使OD值升高。

    （5）抗原與(yu) 抗體(ti) 反應達到完全平衡，依賴於(yu) 溫度與(yu) 時間。溫度高於(yu) 45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低於(yu) 4℃，影響反應速度。總之，由於(yu) ELISA實驗的影響因素較多，在實際工作中必須操作規範、仔細，避免和排除各種因素的影響，使之得到準確可靠的檢驗結果。

此外，還有一些細節同樣不容忽視，它們(men) 雖看似微小，卻可能對ELISA法的測定結果產(chan) 生顯著影響。

（6）實驗環境的清潔度至關(guan) 重要。空氣中漂浮的微粒、塵埃或其他汙染物若落入反應孔中，可能會(hui) 幹擾抗原-抗體(ti) 反應，導致結果偏差。因此，實驗區域應保持整潔，並定期進行消毒處理。

（7）實驗人員的操作習(xi) 慣也會(hui) 影響測定結果。例如，使用移液槍時的手法、力度以及加樣順序等，都可能因個(ge) 人習(xi) 慣不同而引入誤差。因此，建議實驗人員接受專(zhuan) 業(ye) 培訓，形成統一、規範的操作流程。

（8）樣本的儲(chu) 存與(yu) 處理也是關(guan) 鍵因素。樣本的采集、運輸和保存條件需嚴(yan) 格控製，以避免樣本變質或汙染。同時，樣本的稀釋比例、處理時間等也應遵循說明書(shu) 要求，以確保測定結果的準確性。

綜上所述，ELISA法手工測定的準確性受到多方麵因素的影響。為(wei) 了提高測定結果的可靠性，實驗人員不僅(jin) 要嚴(yan) 格遵守操作規程，還需注重實驗環境的維護、個(ge) 人操作習(xi) 慣的培養(yang) 以及樣本的妥善處理。隻有這樣，才能確保ELISA法在血站和醫院實驗室中發揮更大的作用。