乙酰羧化酶（ACC）操作流程描敘

操作流程描敘：

         、將要進行實驗的版孔進行設定好，標準品 5 個(ge) 點，每個(ge) 點設定平行，需要用到 0 個(ge) 孔，空白隻需 個(ge) 孔。剩下孔可以做為(wei) 樣本孔

         2、 稀釋標準，準備好 5 個(ge) EP 管，然後在每個(ge) EP 管中加入 50 微升標準稀釋液，編上編碼，分別為(wei) ，2，3，4,5，在 號管中加入 50 標準品，用槍頭反複吹打 0 次左右（注意控製幅度不要過大容易產(chan) 生氣泡）如果有渦旋儀(yi) 可以在渦旋儀(yi) 上渦旋 5 秒左右，然後換槍頭，在 號管中取 50 微升加入到 2 號管，後麵過程一次類推。最後稀釋完，前麵 4 個(ge) 管中每管液體(ti) 在 50 微升，5 號管為(wei) 300 微升。濃度是從(cong) 大到小。

         3、 標準、樣本、空白加樣：標準是每個(ge) 濃度點 2 個(ge) 孔（做平行），每孔加入 50 微升，加樣過程中注意換槍頭，樣本孔中每孔加入 50 微升，加樣過程中注意換槍頭，空白孔加入 50 微升標準稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是，標準加樣和樣本加樣盡量控製在 5 分鍾內(nei) 加完，如果時間拖的太長，會(hui) 導致前麵孔先反應後麵孔才開始反應，這樣數值偏差過大。加完樣後蓋上封板膜，至 37 攝氏度孵育 30 分鍾.

        4、洗版，在孵育過程中可以將洗滌液配好，20 ml30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到 600 ml 即可。每孔加入 250-300 微升的洗滌液（不要漫過版孔），（如果有震蕩儀(yi) 的話，可以講板子放入震蕩儀(yi) 上 5 秒左右，然後靜止三十秒，沒有請忽略次過程）將板子在桌子上晃動 5 秒左右，然後靜置 30 秒，甩幹，拍板。說明：甩幹過程盡量要快， 秒內(nei) 就可以完成，不要慢慢傾(qing) 斜倒掉液體(ti) ，直接翻板甩掉液體(ti) 即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙，版孔朝下拍幾下，拍幹區別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為(wei) 完成。

         5、每孔加入 50 微升的酶標試劑，此處在空白孔中不需要加（空白孔為(wei) 空），孵育 30 分鍾。

         6、  洗版同步驟 4

         7、顯色，先每孔中加入 50 微升的顯色 A 液，然後每孔中加入 50  微升顯色  B  液。避光 37 攝氏度顯色 5 分鍾

         8、終止，每孔加入 50 微升的終止液，注意，加完終止液必須在 5  分鍾內(nei) 讀數，超過時間讀數無效。在規定時間內(nei) 讀數都是有效的。

         9、至此，整個(ge) 實驗結束。

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