鱈魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒熒光定量PCR實驗步驟

熒光定量PCR實驗步驟：

①產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鍾使其*溶解。
②兩(liang) 相分離 每ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體(ti) 5秒後，5到30℃孵育2到3分鍾。4℃下2000rpm離心5分鍾。離心後混合液體(ti) 將分為(wei) 下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配於(yu) 水相中。水相上層的體(ti) 積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中。加等體(ti) 積異丙醇混合以沉澱其中的RNA，混勻後5到30℃孵育0分鍾後，於(yu) 4℃下2000rpm 離心0分鍾。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側(ce) 壁上形成膠狀沉澱塊。
④RNA清洗 移去上清液，每mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配製)，清洗RNA沉澱。混勻後，4℃下7000rpm離心5分鍾。
⑤RNA幹燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-0分鍾。
⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存於(yu) -80℃待用。 )紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(:00)後，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

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