雙抗體夾心法與間接法

雙抗體(ti) 夾心法：

() 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) ～0μg/ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nei) 溶液，用洗滌緩衝(chong) 液洗3次，每次3分鍾。(簡稱洗滌，下同)。

(2) 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.ml於(yu) 上述已包被之反應孔中，置37℃孵育小時。然後洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

(3) 加酶標抗體(ti) ：於(yu) 各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) (經滴定後的稀釋度)0.ml。37℃孵育0.5～小時，洗滌。

(4) 加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鍾。

(5) 終止反應：於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

(6) 結果判定：可於(yu) 白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對照孔調零後測各孔O·D值，若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.倍，即為(wei) 陽性。

間接法：

    用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至～0μg/ml，每孔加0.ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體(ti) )0.ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)於(yu) 反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) (抗抗體(ti) )0.ml，37℃孵育30-60分鍾，洗滌,zui後一遍用DDW洗滌。其餘(yu) 步驟同“雙抗體(ti) 夾心法"的4、5、6。