蘇木素複染時間和PBS 的清洗方式的選擇

蘇木素複染時間的把握？
 
.蘇木素複染時間要看當時的室溫、溶液的新舊、目標抗原的定位等情況，一般數秒-數分鍾。不過這個(ge) 如果染色不理想可以補救的。即：染色深則分化時間稍長些即可；染色淺則再置於(yu) 蘇木素中染色即可。抗體(ti)
 
2.鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭(lan) 。作用不同。片子複染完後流水振洗，然後置於(yu) 鹽酸酒精中數秒（動作一定要快）後拿出流水振洗，在放入氨水中返蘭(lan) 即可。
 
3.如果分化的顏色過淺，可以複置於(yu) 蘇木素中染色。
 
PBS 的清洗方式選擇、次數和時間的選擇？
 
.單獨衝(chong) 洗，防止交叉反應造成汙染。
 
臨(lin) 床上每天檢測的病例很多，所用的抗體(ti) 種類及項目也多，如果在加入一抗孵育完後，將它們(men) 在一個(ge) 缸內(nei) 洗，這樣就會(hui) 造成交叉汙染，影響zui後的結果。正確的做法是單獨地進行衝(chong) 洗，衝(chong) 洗的 PBS 為(wei) 一次性，保證切片沒有相互交叉汙染的機會(hui) 。
 
2.溫柔衝(chong) 洗，防止切片的脫落。
 
衝(chong) 洗切片，取出切片，將 PBS 從(cong) 上輕輕地衝(chong) 洗，讓 PBS 自上而下流下來，不要拿起切片將 PBS 對準切片衝(chong) 洗，這樣由於(yu) 衝(chong) 出的 PBS 有一定的衝(chong) 擊力，很容易使切片周邊引起鬆動，導致切片的脫落。
 
3.衝(chong) 洗的時間要足夠，才能*洗去結合的物質。
 
衝(chong) 洗切片有人提出用微振蕩器振染，振下未結合的各種物，使之不產(chan) 生背景，此種做法一是浪費時間，二是很容易導致切片的脫落。切片的衝(chong) 洗據實踐認為(wei) ，用一小燒杯柔和地於(yu) 切片上衝(chong) 洗，就能*衝(chong) 洗去未結合的物質，無需附加其它條件，衝(chong) 洗好於(yu) 切片上再注入 PBS，持續 2 min 左右就*足夠了。
 
4.PBS 的 pH 和離子強度的使用和要求。
 
劉彥仿指出：中性及弱鹼性條件（pH7-8）有利於(yu) 免疫複合物的形成，而酸性條件則有利於(yu) 分解；低離子強度有利於(yu) 免疫複合物的形成，而高離子強度則有利於(yu) 分解。我們(men) 目前常用的 PBS 的 pH 在 7.4-7.6 ，濃度是 0.0 M，根據本室十幾年來的使用情況，認為(wei) 該溶液價(jia) 格便宜配製方麵，使用效果好。
 
5.常用試劑的配製和使用。
 
在免疫組織化學的染色過程中，用得zui多的試劑就是緩衝(chong) 液，因為(wei) 切片在整個(ge) 染色中，抗體(ti) 的加、換、切片的衝(chong) 洗，DAB 的配製都離不開緩衝(chong) 液。可見緩衝(chong) 液在整個(ge) 染色中都起至關(guan) 鍵的作用，緩衝(chong) 液的過酸或偏堿，都將影響染色的結果。