細胞培養基的形態分類及汙染消除

　　細胞培養基的形態分類及汙染消除
　　
　　體外培養基細胞根據它們在培養器皿是否能貼附於支持物上生長特征，可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細胞在培養時能貼附在支技物表麵生長。如羊水細胞為貼附型細胞，常表現為成纖維型細胞和上皮細胞生長。懸浮型細胞在培養中懸浮生長。
　　
　　、成纖維型細胞
　　
　　在培養中的細胞凡形態與成纖維細胞類似時，皆可稱之為成纖維細胞。本型細胞由形態與體內成纖維細胞的形態相似而得名，細胞在支持物表麵呈梭形或不規則三角形生長，細胞有卵園形核，胞質向外伸出2-3厘米個長短不同的突起，除真正的成纖維細胞外，凡由中胚層間質起源的組織細胞常呈本類形態生長。
　　
　　2、上皮型細胞
　　
　　此類型細胞在培養基器皿支持物上生長具有扁平不規則多角形特征，細胞有園形核，細胞緊密相連單層膜樣生長。起源於內、外胚層細胞如皮膚、表皮衍生物、消化管上皮等組織細胞培養時，皆呈上皮型形態生長。
　　
　　3、遊走型細胞
　　
　　本型細胞在支持物上散在生長，一般不連成片。細胞質經常伸出偽足或突起，呈活躍的遊走或變形運動，速度快且不規則。此型細胞不很穩定，有時亦難和其它型細胞區別。在一定的條件下，由於細胞密度增大聯成片後，可呈類似多角型或成纖維細膩包形態。常見於羊水細胞培養的早期。
　　
　　當重要的培養基汙染時，研究者可能試圖消除或控製汙染。首先，確定汙染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把汙染細胞與其它細胞係隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超淨台，檢查HEPA過濾器。
　　
　　高濃度的抗生素和抗黴菌素可能對一些細胞係有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗黴菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如和抗黴菌素如泰樂菌素時尤其重要。下麵是的確定毒性水平和消除培養汙染的實驗步驟。
　　
　　)在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。
　　
　　2)分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個小培養基瓶中。在一個濃度梯度範圍內，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，下列濃度，0.25，0.50，.0，2.0，4.0,8.0mg/ml。
　　
　　3)每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。
　　
　　4)確定抗生素毒性水平後，使用低於毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2-3代。
　　
　　5)在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
　　
　　6)重複步驟4。
　　
　　7)在無抗生素的培養基中培養4-6代，確定汙染是否以已被消除。