MAMSTR蛋白抗體抗體分子標記技術

MAMSTR蛋白抗體(ti) 抗體(ti) 分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為(wei) 分子,所生成的自由分子可與(yu) 某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為(wei) 殘基,殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管後,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然後把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。

（二）準備

1.試劑

經親(qin) 和層析純化的多克隆抗體(ti) 或單克隆抗體(ti) ；0.5mol/L磷酸鈉緩衝(chong) 液,pH7.5；無載體(ti) 的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮製備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩衝(chong) 液(pH7.5）；胺T反應終止緩衝(chong) 液；

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩衝(chong) 液中進行；

2.如果氧化反應損傷(shang) 蛋白質，可將抗體(ti) 與(yu) 異硫酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m，並將偏重亞(ya) 硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在幹燥器中,於(yu) 室溫下保存多年；

4.1251標記的抗體(ti) ,在製備後六周內(nei) 均可使用(1251的半衰期為(wei) 59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊製劑的比活性低；

6.碘化偶爾會(hui) 對抗原的抗體(ti) 結合位點有幹擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。