枝孢黴通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒應用案例

枝孢黴通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒應用案例：

樣品 DNA 的製備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。

稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度為(wei) 例。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分）。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 樣品做陽性對照，隻提供可以直接使用的長為(wei) 86bp 的 DN段作為(wei) 陽性對照。

2.標記 6 個(ge) 離心管，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。

3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鍾，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鍾，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鍾，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

8.重複上麵的操作直到得到 6 個(ge) 稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應（20  μL 體(ti) 係，在樣品製備室進行）

9.在 PCR 管中加入下列成分。