hth体育下载地址方法類型和操作步驟

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　　ELISA可用於(yu) 測定抗原，也可用於(yu) 測定抗體(ti) 。在這種測定方法中有3種必要的試劑：① 固相的抗原或抗體(ti) ，② 酶標記的抗原或抗體(ti) ，③ 酶作用的底物，根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的條件，可設計出各種不

　　同類型的檢測方法。

　　(一)雙抗體(ti) 夾心法：

　　雙抗體(ti) 夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗體(ti) 與(yu) 固相載體(ti) 連接，形成固相抗體(ti) ：洗滌除去未結合的抗體(ti) 及雜質。

　　(2)加受檢標本：使之與(yu) 固相抗體(ti) 接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與(yu) 同相載體(ti) 上的抗體(ti) 結合，形成固相抗原複合物。洗滌除去其他未結合的物質。

　　(3)加酶標抗體(ti) ：使同相免疫複合物上的抗原與(yu) 酶標抗體(ti) 結合。*洗滌未結合的酶標抗體(ti) 。此時固相載體(ti) 上帶有的酶量與(yu) 標本中受檢物質的量正相關(guan) 。

　　(4)加底物：酶催化底物成為(wei) 有色產(chan) 物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

　　根據同樣原理，將大分子抗原分別製備固相抗原和酶標抗原結合物，即可雙抗原夾心法測定標本中的抗體(ti) 。

　　(二)雙位點一步法：

　　在雙抗體(ti) 夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩(liang) 個(ge) 不同抗原決(jue) 定簇的單克隆抗體(ti) 分別作為(wei) 固相抗體(ti) 和酶標抗體(ti) ，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體(ti) 的加入兩(liang) 步並作一步。這種雙位點一步法不但簡化了操作，

　　縮短了反應時間，如果使用高親(qin) 和力的單克隆抗體(ti) ，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體(ti) 的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法測定中，應注意鉤狀效應(hook effect)，類同於(yu) 沉澱反應中抗原過剩的後滯現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體(ti) 及酶標抗體(ti) 結合，而不再形成夾心複合物，所得結果將低於(yu) 實際含量。鉤狀效應嚴(yan) 重時甚至可出現假陰性結果。

　　(三)間接法測抗體(ti) ：

　　間接法是檢測抗體(ti) 時zui常用的方法，其原理為(wei) 利用酶標記的抗-抗體(ti) 檢測已與(yu) 固相結合的受檢抗體(ti) 。故稱為(wei) 間接法。操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗原與(yu) 固相載體(ti) 連接，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。

　　(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體(ti) 與(yu) 抗原結合，形成固相抗原抗體(ti) 複合物。經洗滌後，固相載體(ti) 上隻留下特異性抗體(ti) 。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由於(yu) 不能與(yu) 固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

　　(3)加酶標抗抗體(ti) ：與(yu) 固相複合物中的抗體(ti) 結合，從(cong) 而使該抗體(ti) 間接地標記上酶。洗滌後，固相載體(ti) 上的酶量就代表特異性抗體(ti) 的量。例如： 欲測人對某種疾病的抗體(ti) ，可用酶標羊抗人lgG抗體(ti) 。

　　(4)加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體(ti) 的量。