羊抗人血清抗體

簡要描述：羊抗人血清抗體(ti) ,抗體(ti) 種類,多種試劑現貨供應!

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更新時間：2023-10-24 00:00:00
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羊抗人血清抗體(ti) *,羊抗人血清抗體(ti) 用於(yu) 免疫組化實驗，WB實驗，相應的標記抗體(ti) 有HRP標記抗體(ti) ，FITC標記，BIO等。

【貯存條件】：貯存於(yu) -20℃. 本品應在低溫下保存，長時間在暴露在空氣中，含量會(hui) 有所降低。

規格：0.5ml

材料和方法

　　. 材料人成骨肉瘤MG63細胞為(wei) 本實驗室保存。重組質粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王岩教授惠贈。脂質體(ti) 2000( Invitrogen公司)。高糖DMEM培養(yang) 基(美國Gibco 公司)，胎牛血清(Hyclone公司)，*和EDTA(Sigma 公司)。A2387，KN93，CaM，重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)。抗體(ti) ：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共沉澱(Protein Gagarose)試劑盒(邁晨科技有限公司)。

　　.2 蛋白印跡實驗 MG63細胞鋪於(yu) 35 mmol/L培養(yang) 皿中，待細胞密度達到60%～70%時，轉染MycSSHL，48 h後換無血清培養(yang) 基培養(yang) 3 h，分別加入濃度為(wei) 0.5，，2.5，5 μmol/L的A2387孵育0 min後裂解細胞，離心取上清加入凝膠加樣緩衝(chong) 液,沸水浴上加熱5 min，上樣、電泳、轉膜、雜交〔一抗分別為(wei) Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。

　　.3 體(ti) 外激酶測定 MycSSHL(WT)及其突變體(ti) MycSSHL(2 SA)分別轉染至MG63細胞，48 h後采用免疫共沉澱(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體(ti) ，對照組為(wei) 抗IgG抗體(ti) 。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml重組活性CaMKⅡ(單獨或同時加入抑製劑KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 於(yu) 20 μl 激酶反應緩衝(chong) 液中，30℃反應40 min。反應產(chan) 物進行SDSPAGE電泳、轉膜，應用放射自顯影技術檢測32P 標記的SSHL水平。

　　.4 體(ti) 外SSHL磷酸酶活性測定實驗 MycSSHL(WT)或MycSSHL (2 SA)轉染至MG63細胞，48 h後，采用免疫共沉澱(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體(ti) ，對照組為(wei) 抗IgG抗體(ti) 。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨或同時加入抑製劑KN93)，20 μg/ml CaM，以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 於(yu) 20 μl 反應緩衝(chong) 液(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中30℃反應2 h。反應產(chan) 物進行SDSPAGE電泳、轉膜、雜交(一抗分別為(wei) Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗體(ti) )、ECL顯色。

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