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熒光素標記脫羧酶-65抗體(ti) IgG樣本的物種 應選擇物種相同或有交叉反應的抗體(ti) ,抗體(ti) 可能與(yu) 不同物種的同種靶蛋白有交叉反應,因其氨基酸序列同源性較高,如果樣本的種類未列入抗體(ti) 說明書(shu) 上的交叉反應種屬表中,並不意味著該抗體(ti) 不適用於(yu) 檢測該物種的蛋白,而隻是表示該物種尚未用此抗體(ti) 檢測驗證過,應通過序列比對的方法來預測交叉反應,可應用Expasy 和 NCBI BLAST 來進行不同物種蛋白同源性比對。
熒光素標記脫羧酶-65抗體(ti) IgG一抗宿主物種的選擇一般說來,在使用偶聯二抗結合無偶聯物的一抗時,一抗宿主動物的物種選擇較為(wei) 重要,對於(yu) 免疫組化而言,盡可能選擇與(yu) 樣本不同種係物種的一抗,從(cong) 而避免二抗與(yu) 樣本內(nei) 源性免疫球蛋白產(chan) 生交叉反應,例如:檢測小鼠樣本蛋白,則不應選擇小鼠或大鼠源的一抗,選兔源的一抗,則二抗則可選擇偶聯了檢測分子(酶、熒光素、等)的抗兔IgG。如果選擇有偶聯物的一抗則不適用上述情況,除免疫組化外的其它對不含內(nei) 源性免疫球蛋白樣本的檢測方法,則抗體(ti) 宿主物種的影響不大,如對不含IgG 的細胞裂解物樣本的western blotting檢測,盡管如此,含有血清的組織裂解物和組織培養(yang) 上清中含有免疫球蛋白,還原變性樣本中含IgG,在western blot 檢測中則結合出現IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。二抗的選擇 二抗應選用與(yu) 使用的一抗相同的物種來源,例如:如果你的一抗是小鼠的單克隆抗體(ti) ,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建議檢查二抗說明書(shu) 確保該抗體(ti) 適用於(yu) 你的檢測應用, 二抗一般連接熒光素FITC 或發光團。
上海穀研生物科技有限公司特殊抗體(ti) 的保存條件:. 酶聯抗體(ti) :永遠保存在4 度,避免凍起來。否則會(hui) 導致酶活性的下降或者喪(sang) 失2. 偶聯抗體(ti) :所有偶聯抗體(ti) 都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體(ti) ,對光極為(wei) 敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的!3. IgG3 的同型對照:永遠保存在4 度,避免凍起來。因為(wei) 如果出現凍融過程,該抗體(ti) 非常容易形成多聚體(ti) 無論是保存還是運輸,避免反複凍融!反複凍融會(hui) 導致抗體(ti) 變性,導致多聚體(ti) 形成,從(cong) 而降低抗體(ti) 的結合能力!
關(guan) 於(yu) 加入甘油保存:有些人會(hui) 加50%的甘油到抗體(ti) 中來避免反複凍融,甘油在-20 度 會(hui) 降低冰點。這對很多抗體(ti) 可能是可行的。但是abcam 僅(jin) 對非常小的一部分抗體(ti) 檢測過其在這種條件下的穩定性;而abcam 隻對按照條件保存的抗體(ti) 提供質量保證!加入甘油的溶液不建議在-80 度保存,因為(wei) 這已經超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體(ti) 的話,請謹慎注意無菌操作,避免汙染!關(guan) 於(yu) 蛋白保護劑:蛋白在高濃度時更不容易降解( mg/ml 或者更高),這就是為(wei) 什麽(me) 在抗體(ti) 中加入BSA 之類作為(wei) 穩定劑的原因了;另一方麵,加入的蛋白也可以減少抗體(ti) 由於(yu) 管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體(ti) 要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為(wei) 這些穩定劑會(hui) 和抗體(ti) 一起競爭(zheng) 結合標記物。
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