γ穀氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)測試盒可見分光光度法
分光光度法 50 管/48 樣
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GCL 是 GSH 合成的限速酶,GSH 對 GCL 有反饋抑製作用。GCL 基因表達受多種因素
調節,如氧化劑、抗氧化劑、生長因子和炎症因子等。GCL 活性高低對 GSH 含量和 GSH/GSSG
比值有重要影響。
測定原理:
在 ATP 和 Mg2+存在下,GCL 催化穀氨酸和半胱氨酸合成γ-穀氨酰半胱氨酸;同時 ATP 去磷
酸化產生無機磷分子,通過測定無機磷增加速率,即可計算出 GCL 活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、冷凍離心機、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸和蒸餾水。
試劑組成和配製:
試劑一:液體 70mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 14mL 蒸餾水充分震蕩溶解。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入蒸餾水 3.5 mL 充分震蕩溶解。
試劑四:液體 16mL×1 瓶,室溫保存。
試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 30mL 蒸餾水,充分震蕩溶解後,緩緩加入 1.0 mL
濃硫酸(自備),邊加邊攪拌
