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產(chan) 品名稱 | 規格 | 貨號 |
L-WRN（小鼠皮下結締組織細胞） | 1×10⁶/T25培養(yang) 瓶 | GOY-01X0641 |
商品詳情：
名稱；L-WRN (小鼠皮下結締組織細胞) (新引進) (種屬鑒定正確)
種屬 小鼠
生長特性 貼壁細胞
細胞形態 成纖維細胞樣
生長培養(yang) 基 DMEM＋10% FBS+0.5 mg/mL G-418+0.5 mg/mL hygromycin B＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yang) 基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yang) 條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳(chuan) 代比例 1:2-1:3
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 L-WRN細胞通過R-spondin 3和noggin共表達載體(ti) 轉染L-Wnt3A 獲得，並在含有G418和潮黴素b的培養(yang) 基中選擇穩定克隆。
年齡（性別） 100 days
細胞類型 自發永生化細胞
生物安全等級 2
細胞培養(yang) 步驟：
一、L-WRN（小鼠皮下結締組織細胞）複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鍾，棄去上清液，補加4-6mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yang) 過夜。第二天換液並檢查細胞密度。
二、細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
a）、 對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2min，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加5ml以上含10%血清的培養(yang) 基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，脫落後吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yang) 液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yang) 液的新皿中或者瓶中。
b）、對於(yu) 懸浮細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鍾，棄上清液，補加1-2ml培養(yang) 液後吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yang) 基後，將剩餘(yu) 細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yang) 基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞後，用75%酒精噴灑整個(ge) 管子消毒後放到超淨台或安全櫃內(nei) ，嚴(yan) 格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yang) 瓶或6cm培養(yang) 皿，加入5ml左右培養(yang) 基混勻，放入培養(yang) 箱過夜培養(yang) 後查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養(yang) ，視情況傳(chuan) 代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳(chuan) 代（方法同上）。
三、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養(yang) 瓶的80%麵積時，棄25cm2培養(yang) 瓶中的培養(yang) 液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yang) 瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後加入培養(yang) 液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然後將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，並放置於(yu) 凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置於(yu) -20℃ 1.5h，然後將其移入-80℃
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