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產(chan) 品名稱：UDP葡萄糖神經酰胺葡萄糖基轉移酶(UGCG)活性蛋白(((Rat，大鼠)
物種：Homo sapiens
(Human，人), Mus musculus (Mouse，小鼠),
Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
英文名稱：Active UDP
Glucose Ceramide Glucosyltransferase (UGCG)
GCS; GLCT-1; Glucosylceramide Synthase; N-acylsphingosine D-glucosyltransferase
型號：GOY-01D3127
物種 | Homo sapiens (Human，人), Mus musculus (Mouse，小鼠), Rattus
norvegicus (Rat，大鼠) |
來源 | 活性蛋白 |
宿主 | E.coli |
亞(ya) 細胞定位 |
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預測分子量 |
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實際分子量 |
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片段與(yu) 標簽 |
|
緩衝(chong) 液成份 | 20mM Tris, 150mM NaCl緩衝(chong) 液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM
DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300） |
性狀 | 凍幹粉 |
純度 | > 95% |
內(nei) 毒素水平 |
|
等電點 | 6.7 |
應用 | Cellculture;ActivityAssays. |
規格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
Ⅰ 實體(ti) 組織蛋白的提取
1．UDP葡萄糖神經酰胺葡萄糖基轉移酶(UGCG)活性蛋白(((Rat，大鼠)在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑製劑， 1 μL蛋白酶抑製劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鍾待用。
2． 每100mg固體(ti) 組織置於(yu) 培養(yang) 皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為(wei) 全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存於(yu) -70℃,避免反複凍融。
Ⅱ 培養(yang) 細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yang) 的細胞，吸去培養(yang) 基後，加入10mL/150mm培養(yang) 板的冷PBS洗兩(liang) 次，每次振搖數次以盡量去除培養(yang) 液；
2． 懸浮培養(yang) 的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yang) 液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yang) 板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩(liang) 次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑製劑， 1μL蛋白酶抑製劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鍾待用。
4． 細胞洗滌後，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配製好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
5．置於(yu) 4℃搖床平台上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為(wei) 全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）
7． 分裝保存於(yu) -70℃,避免反複凍融
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