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基本屬性：
| 【產品名稱】 | 促生長轉ScGH基因成分核酸檢測試劑盒 |
| 【型號】 | GOY-M1875 |
| 【包裝規格】 | 50次/盒 |
特點：
1.即開即用，用戶隻需要提供樣品DNA模板。 2.引物和探針經過優(you) 化，靈敏性高。 3.提供陽性對照，便於(yu) 區分假陰性樣品。 4.特異性高，引物是根據曲黴屬通用DNA高度保守區設計，不會(hui) 跟其他微生物的DNA發生交叉反應。 5.既可用於(yu) 定性檢測，又可用於(yu) 定量檢測。用於(yu) 定量檢測時線性範圍至少為(wei) 5個(ge) 數量級。 6.本產(chan) 品足夠50次20μL體(ti) 係的探針法熒光定量PCR反應。 7本產(chan) 品隻能用於(yu) 科研。 |
【使用方法】
一、稀釋標準曲線樣品（以10E1-10E6拷貝/μL這6個(ge) 10倍稀釋度為(wei) 例）。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 樣品做陽性對照，隻提供無傳(chuan) 染性的DNA片段作為(wei) 陽性對照。 1.標記6個(ge) 離心管，分別為(wei) 6，5，4，3，2，1。 2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuan) 用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。 3.在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鍾，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。 4.換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鍾，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。 5.換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鍾，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。 6.重複上麵的操作直到得到6個(ge) 稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的製備 7.如果有N個(ge) 樣品待提取，設置N+2個(ge) 提取，多出的是PC（樣品製備陽性對照）和NC（樣品製備陰性對照）。可以取陽性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體(ti) 積與(yu) 待提取樣品的規定體(ti) 積一致，以此作為(wei) PC。另外用水作為(wei) NC。 8.用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數兼容。 三Probe qPCR反應（20μL體(ti) 係，在樣品製備室進行） 9.如果做定量分析並且隻做1次重複，則標記N+9個(ge) PCR管，其中N+2個(ge) 用於(yu) 上步得到的N+2個(ge) 樣品，1個(ge) 用於(yu) PCR 陰性對照（用水做模板），6個(ge) 用於(yu) 標準曲線。如果做定性分析，並且隻做1次重複，則標記N+4個(ge) PCR管，其中N+2個(ge) 用於(yu) 上步得到的N+2個(ge) 樣品，1個(ge) 用於(yu) PCR陰性對照（用水做模板），1個(ge) 用於(yu) PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下麵隻以定量分析為(wei) 例描述操作步驟。 10.在標記管中按下表加入各成分 |
數據處理
12. 如果把本試劑盒用於(yu) 定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為(wei) 橫軸，以 Ct 值為(wei) 縱軸，繪製標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從(cong) 標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用於(yu) 定性檢測，隻判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大 於(yu) 或等於(yu) 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該 小於(yu) 或等於(yu) 30。對待測樣品，如果其 Ct 大於(yu) 或等於(yu) 40 則為(wei) 陰性，如果小於(yu) 或等於(yu) 35 則為(wei) 陽性。如果在 35-40 之間，則重複一次。重複實驗的 Ct 值如果大於(yu) 或等於(yu) 40 則為(wei) 陰性，如果小於(yu) 40，則為(wei) 陽性。
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