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產(chan) 品分類
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【產(chan) 品名稱】曲黴屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
Aspergillus spp. Aspergillus spp.Probe qPCR Kit
【型號：】GOYL44N
【包裝規格】50次/盒 
【產(chan) 品及特點】曲黴屬，曲黴目中的一屬，包括米曲黴、黑曲黴等。一方麵有很多菌種可被用於(yu) 各種有益物質的生產(chan) ，如用於(yu) 蛋白消化劑的蛋白酶（醬油曲黴）、檸檬酸（黑曲黴）、衣康酸（土曲黴、解烏(wu) 頭酸曲黴）以及曲酸（黃曲黴）等。但另一方麵，也有不少侵害家禽、家畜甚至人體(ti) 內(nei) 髒特別是呼吸器官的病菌，如引起曲黴症的煙曲黴等。因此快速靈敏檢測曲黴屬具有重要意義(yi) 。本產(chan) 品就是以探針法熒光定量PCR技術為(wei) 基礎開發的專(zhuan) 門檢測曲黴屬通用的試劑盒，它具有下列特點：
1.即開即用，用戶隻需要提供樣品DNA模板。
2.引物和探針經過優(you) 化，靈敏性高。
3.提供陽性對照，便於(yu) 區分假陰性樣品。
4.特異性高，引物是根據曲黴屬通用DNA高度保守區設計，不會(hui) 跟其他微生物的DNA發生交叉反應。
5.既可用於(yu) 定性檢測，又可用於(yu) 定量檢測。用於(yu) 定量檢測時線性範圍至少為(wei) 5個(ge) 數量級。
6.本產(chan) 品足夠50次20μL體(ti) 係的探針法熒光定量PCR反應。
7本產(chan) 品隻能用於(yu) 科研。
曲黴屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒【規格及成分】
成分 | 規格 |
A | 500 μL |
B | 1 mL |
C | 1 mL |
D | 150 μL |
E | 50 μL |
使用手冊(ce) | 1份 |
【運輸及保存】低溫運輸，-20℃保存，保存期限為(wei) 12 個(ge) 月。
【自備試劑】 樣品 DNA。
【使用方法】一、稀釋標準曲線樣品（以10E1-10E6拷貝/μL這6個(ge) 10倍稀釋度為(wei) 例）。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 樣品做陽性對照，隻提供無傳(chuan) 染性的DNA片段作為(wei) 陽性對照。
1.標記6個(ge) 離心管，分別為(wei) 6，5，4，3，2，1。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuan) 用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3.在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鍾，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鍾，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鍾，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.重複上麵的操作直到得到6個(ge) 稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的製備
7.如果有N個(ge) 樣品待提取，設置N+2個(ge) 提取，多出的是PC（樣品製備陽性對照）和NC（樣品製備陰性對照）。可以取陽性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體(ti) 積與(yu) 待提取樣品的規定體(ti) 積一致，以此作為(wei) PC。另外用水作為(wei) NC。
8.用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數兼容。
三Probe qPCR反應（20μL體(ti) 係，在樣品製備室進行）
9.如果做定量分析並且隻做1次重複，則標記N+9個(ge) PCR管，其中N+2個(ge) 用於(yu) 上步得到的N+2個(ge) 樣品，1個(ge) 用於(yu) PCR
陰性對照（用水做模板），6個(ge) 用於(yu) 標準曲線。如果做定性分析，並且隻做1次重複，則標記N+4個(ge) PCR管，其中N+2個(ge) 用於(yu) 上步得到的N+2個(ge) 樣品，1個(ge) 用於(yu) PCR陰性對照（用水做模板），1個(ge) 用於(yu) PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下麵隻以定量分析為(wei) 例描述操作步驟。
10.在標記管中按下表加入各成分（本表隻列出一次重複。樣品管和陰性對照設置完畢後才設置陽性對照，並且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chu) 存好後最後加）：
成分 | 樣品管 N+2 個(ge) | PCR 陰性對照 | 標準曲線樣品管 （1-6 管） |
A | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
D | 3 μL | 3μL | 3 μL |
N+2個(ge) 待測DNA模板 | 7 μL | - | - |
C | - | 7 μL | - |
第6步所得標準曲線樣品稀釋液（1-6號） | - | - | 7 μL（1 號樣到 1 號管，2 號樣到 2 號管…） |
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 95℃ | 10 min |
PCR反應 （45個(ge) 循環） | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 60 sec（采集FAM通道的熒光信號） |
12. 如果把本試劑盒用於(yu) 定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為(wei) 橫軸，以 Ct 值為(wei) 縱軸，繪製標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從(cong) 標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用於(yu) 定性檢測，隻判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大 於(yu) 或等於(yu) 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該 小於(yu) 或等於(yu) 30。對待測樣品，如果其 Ct 大於(yu) 或等於(yu) 40 則為(wei) 陰性，如果小於(yu) 或等於(yu) 35 則為(wei) 陽性。如果在 35-40 之間，則重複一次。重複實驗的 Ct 值如果大於(yu) 或等於(yu) 40 則為(wei) 陰性，如果小於(yu) 40，則為(wei) 陽性。
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