土壤DNAout

土壤DNAout
產(chan) 品及特點 由於(yu) 土壤中有機質含量豐(feng) 富,尤其是其中的腐殖酸對PCR等後續反應有的抑製作用,所以從(cong) 土壤微生物提取高純度的DNA一直是十分棘手的問題。本產(chan) 品是天澤基因精心優(you) 化的專(zhuan) 門用於(yu) 從(cong) 各種土壤樣品和河海沉積物中提取高質量的DNA的試劑。
. 去汙染效果好，OD260/280一般都在.8以上, OD260/340一般都在3.0以上（表示腐殖酸少）,得到的DNA樣品原液或稀釋液可以直接用於(yu) PCR等後續反應。
2. 產(chan) 量高，每克土壤一般可以提取到5 ug 左右DNA，片段長度在30 Kb左右。
3. 操作過程簡單快速，隻需要30分鍾。
4. 擴容性好，既可以在.5 mL離心管中微量提取，也可以在50 mL離心管中進行大規模製備。
5. 試劑無毒無害, 環保。
規格及成分 成 份 30 次包裝 00 次包裝
溶液A 5 mL 50 mL
溶液B 5 mL 50 mL
使用手冊(ce) 份 份
注：溶液A和溶液B均為(wei) 無色液體(ti) ，溶液A 4℃保存時會(hui) 產(chan) 生沉澱，用前需要65℃溶化並混勻。

運輸及保存 常溫運輸及保存，有效期一年。
自備試劑 氯仿、無水乙醇、75%乙醇。
使用方法 . 65℃預熱溶液A，待其沉澱溶化後，充分混勻，取0.5 mL加入到.5 mL塑料離心管中並放置於(yu) 65℃待用。
2. 稱取0.-0.3 g的土壤，加入到含預熱溶液A的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-0分鍾。如果是擴量操作，可以使用更多土壤和較大離心管。也可以將同一種土壤在較大離心管中震蕩處理，然後再分到.5 mL離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管，一定要讓管底的土壤震蕩起來。
3. 將離心管置於(yu) 65℃水浴中保溫至少5分鍾。
4. 3000-5000 g室溫離心3分鍾，將上清轉移到一新離心管中（上清液一般呈淡黃色或深棕色，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 腐殖酸的含量，上清的體(ti) 積一般為(wei) 300-400 µL）。
5. 在上清液中加入等體(ti) 積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少5分鍾。
7. 3000-5000 g室溫離心3分鍾，轉移上清到新的.5 mL離心管中，上清液顏色將比第4步得到的上清的顏色稍淡，體(ti) 積在0.7 mL左右。
8. 加入0.2 mL的氯仿（自備），震蕩器上充分振蕩30秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。
9. 3000-5000 g室溫離心3分鍾，小心轉移上清到新離心管中。說明：離心後兩(liang) 相交界麵將有白色膜狀物，其中有機相部分顏色較深，一般呈淡棕色。上清的顏色取決(jue) 於(yu) 土壤中腐殖酸的含量。
0. 重複第8步和第9步一次。zui後將上清轉移到新的.5 mL離心管時，不要超過0.5 mL，否則沒有空間加兩(liang) 倍體(ti) 積的乙醇。如果有多餘(yu) 的可以棄之不用。
. 加入2倍體(ti) 積的乙醇（自備），上下顛倒30秒混勻，5000 g離心5分鍾,棄上清，管底將有微小DNA沉澱，有時候呈棕色。注意：不要用異丙醇代替乙醇，否則腐殖酸更容易於(yu) DNA共沉澱。
2. 加入mL 75%乙醇，震蕩，3000-5000 g室溫離心3分鍾，棄上清。
3. 重複上步清洗一次。注意：75%乙醇洗兩(liang) 次有助於(yu) 去除部分腐殖酸。
4. 短暫離心，吸棄殘留的75%乙醇（約50uL），室溫晾幹。注意：一定要去除殘留的75%乙醇，否則會(hui) 影響後續反應和電泳上樣（樣品會(hui) 飄走）。
5. 加入30 uL TE緩衝(chong) 液溶解沉澱。注意：不知道樣品土壤DNA產(chan) 率前不要加過多TE，如果DNA濃度高，可以再加TE稀釋。
6. DNA即可用於(yu) 電泳、酶切和PCR等反應。 電泳時采取電泳後染色，因為(wei) 實驗發現，殘留腐殖酸會(hui) 吸附走大量的EB，使在腐殖酸後麵的DNA不能染色。PCR時，按終體(ti) 積的/0加入隨贈的PCR抑製物清除劑（CAT#：60804）。