柱式血液RNA-DNAout

柱式血液RNA-DNAout
產(chan) 品及特點 本產(chan) 品是北京天恩澤在柱式血液RNAOUT（CAT#：7202）基礎上開發的升級產(chan) 品，采用先裂解紅細胞後純化白細胞，再從(cong) 中分別提取總RNA和DNA的策略。本產(chan) 品具有下列特點：
. 本產(chan) 品可用於(yu) 血液RNA提取、血液DNA提取以及DNA和RNA雙提，充分利用寶貴的血液樣品。
2. 無需使用有毒的酚和氯仿，綠色環保。
3. 采取先裂解紅細胞的兩(liang) 步法，避免了血紅素等對RNA和DNA的汙染。
4. RNA直接從(cong) 白細胞胞漿中提取，*避免了細胞核基因組DNA的汙染。
5. 純度高，RNA的OD260/280均在2.0左右，DNA的OD260/280均在.8-.9左右
6. 產(chan) 率高，對新鮮血液樣品RNA產(chan) 率一般為(wei) 5-50 ug/mL，DNA的產(chan) 率一般在5-8 ug/mL。對凍存血，RNA和DNA產(chan) 率跟凍存時間密切相關(guan) ，波動。
7. 與(yu) 常用的抗凝劑（包括肝素，EDTA，檸檬酸鈉，草酸鈉）兼容。
8. 得到的RNA可以直接用於(yu) RT-PCR和Northern雜交等研究。所得的DNA可直接用於(yu) PCR、酶切等實驗。
9. 如果需要提取細胞核中的RNA前提，或者提取胞漿中線粒體(ti) DNA，則不能使用本方法。
規格及成分 成 份 A型
RNA提取 B型
DNA提取 C型
RNA-DNA雙提
C型紅細胞裂解液 75 mL 75 mL 75 mL
白細胞裂解液 5 mL 5 mL 5 mL
核酸上柱液 50 mL 50 mL 00 mL
離心吸附柱 50套 50套 00套
通用洗柱液 50 mL 50 mL 00 mL
RNA洗脫液 0 mL 無 0 mL
DNA洗脫液2.0 無 0 mL 0 mL
使用手冊(ce) 份 份 份

運輸及保存 常溫運輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 RNase-free離心管。
使用方法 一：紅細胞裂解（請提前將白細胞裂解液放置在冰上預冷）
. 在.5 mL塑料離心管中，加入0.75 mL新鮮或解凍後的抗凝全血，再加入等體(ti) 積（0.75 mL）的C型紅細胞裂解液，輕柔顛倒混勻。
2. 4000-5000 g 4℃離心0分鍾，棄上清（紅色）。
3. 在細胞沉澱中再加入0.75 mL的C型紅細胞裂解液，重懸沉澱細胞（由白細胞和殘留的紅細胞組成）。
4. 4000-5000 g 4℃離心0分鍾，棄上清。
5. 在細胞沉澱中再加入0.3 mL冰上預冷的的白細胞裂解液，重懸沉澱細胞（主要由白細胞組成）。
6. 冰上放置5分鍾後以裂解白細胞，8000-0000 g 4℃離心8分鍾，將上清（含RNA的胞漿）轉移到RNase-free的塑料管中，立即進行RNA提取。沉澱（細胞核）可暫時存放在-20℃冰箱，用於(yu) 後續基因組DNA提取。

二：RNA提取
. 在約0.3 mL含RNA的胞漿液中加入 mL溶液C，充分震蕩混勻。
2. 室溫放置0分鍾。
3. 將混合液分2次轉移到離心吸附柱中。每次轉移約0.7 mL，然後室溫2000-5000 g離心半分鍾，棄穿透液，再轉移剩下的混合液，再室溫2000-5000 g離心半分鍾，棄穿透液。
4. 加0.7 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，2000-5000 g室溫離心半分鍾，棄穿透液。
5. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鍾，棄穿透液。注意：增加此步可以進一步提高RNA的純度。
6. 室溫2000-5000 g離心半分鍾。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(hui) 影響RNA的後續反應。
7. 將離心吸附柱轉移到一個(ge) RNase-free的收集管（可用.5 mL的RNase-free塑料離心管替代）中，加入50-00 uL RNA洗脫液，室溫放置-2分鍾。
8. 2000-5000 g室溫離心半分鍾，離心管中溶液即為(wei) RNA樣品，可以立即用於(yu) 後續實驗或存放於(yu) -80℃待用。
9. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為(wei) 非變性膠不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：44，2000）。
0. RNA產(chan) 量產(chan) 率測定：將5-0 μL RNA溶於(yu) TE緩衝(chong) 液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（ OD260的RNA=40 μg/mL），進而計算出RNA的產(chan) 量（濃度X體(ti) 積）和產(chan) 率（RNA產(chan) 量/組織用量）。人血RNA產(chan) 率一般為(wei) 5-20 ug/mL。
. RNA純度測定：無汙染的總RNA的OD260/OD280一般在2.0左右（具體(ti) 數值與(yu) 其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guan) ），高於(yu) 此範圍則分別表示樣品可能有蛋白質汙染，但一般不影響RT-PCR等反應。

三：基因組DNA提取
2. 在白細胞細胞核沉澱中加入 mL溶液C，用移液槍充分吹打使溶液不粘稠，否則很難穿過吸附柱。
3. 室溫放置0分鍾。
4. 將混合液分2次轉移到離心吸附柱中。每次轉移約0.7 mL，然後室溫2000-5000 g離心半分鍾，棄穿透液，再轉移剩下的混合液，再室溫2000-5000 g離心半分鍾，棄穿透液。
5. 加0.7 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，2000-5000 g室溫離心半分鍾，棄穿透液。
6. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鍾，棄穿透液。注意：增加此步可以進一步提高DNA的純度。
7. 室溫2000-5000 g離心半分鍾。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(hui) 影響DNA的後續反應。
8. 將離心吸附柱轉移到一個(ge) 收集管中（可用.5 mL的塑料離心管替代），加入50-00 uL DNA洗脫液2.0，室溫放置-2分鍾。
9. 2000-5000 g室溫離心半分鍾，離心管中溶液即為(wei) 基因組DNA。
20. 可以在離心吸附柱中再加入30-50 uL DNA洗脫液2.0洗脫基因組DNA。
2. 匯集2次洗脫的基因組DNA，可以立即用於(yu) 後續實驗或存放於(yu) -80℃待用。