Anti-ORC1L/ORC1抗體(ti) ,起始識別複合蛋白亞(ya) 基1抗體(ti) 凍幹多肽的溶解
1、多肽溶解的主要問題是二級結構的形成。雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除zui短的肽鏈外,此現象產(chan) 生在幾乎所有肽鏈,與(yu) 極性無關(guan) 。所以,溶解多肽的*個(ge) 原則是使用無菌蒸餾水或去離子水,當然無氧水。多肽溶液可能遇到細菌降解,為(wei) 防止此情況的發生,應溶解在無菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,應溶於(yu) 無氧的水中,無氧水可通過注入惰性氣體(ti) (氮、氦、氬)減壓除氣得到;
2、若多肽不溶於(yu) 純水,超聲處理有助於(yu) 打碎顆粒並增加溶解度。注意:超聲處理會(hui) 引起溶液發熱或多肽降解;
3、若多肽含有多個(ge) 堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:對於(yu) 疏水性強的多肽,應使用50%的乙酸;
4、若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基*或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩衝(chong) 液溶解。pH值在層析前必須調整;
5、異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有機溶劑的量必須很少否則將嚴(yan) 重影響停留時間;
6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香鏈而高度疏水、或為(wei) 中性肽時,DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有利於(yu) 多肽的溶解:
a.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級結構而助溶;
b.膜變性劑適於(yu) 多肽分析液的製備,但可能會(hui) 對其生物活性的研究工作造成幹擾;
c.DMF是*變性劑(zui高濃度可達30%),滴加至多肽溶解;
d.反相層析法時,DMF將與(yu) 洗脫液前鋒一起流出,根據入量的多少,峰值可能很高。大多數肽能在大量DMF流出後幾分鍾內(nei) 流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將很低。
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