做ELISA實驗時,選擇何種洗滌方式

     優(you) 化ELISA的重點之一在於(yu) 洗滌。洗滌步驟可降低未結合抗體(ti) 所引起的背景信號，從(cong) 而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保隻有特異的結合事件被保留，在最後一步產(chan) 生信號。而不充分的洗滌會(hui) 導致差異和高背景，從(cong) 而帶來不理想的結果。

    在做ELISA實驗時，洗板有兩(liang) 種方法：手工法洗板 和 洗板機洗板。二者沒有本質的差別，隻要操作合乎要求，均能得到正確、可靠的結果。然而，在實際操作中，選擇何種洗滌方式往往取決(jue) 於(yu) 實驗者的具體(ti) 需求與(yu) 條件。手工法洗板雖然操作相對繁瑣，需要實驗者耐心細致地逐孔加入洗滌液並輕輕拍幹，但它在小規模實驗或資源有限的情況下尤為(wei) 適用。此外，手工法允許實驗者根據具體(ti) 情況調整洗滌力度和次數，對於(yu) 一些特別敏感或易脫落的樣本，可能更具靈活性。

洗板機洗板人為(wei) 因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機洗板時應注意以下三個(ge) 關(guan) 鍵點。

洗滌參數

       主要的參數是洗滌量。自動洗板機會(hui) 分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那麽(me) 不要猶豫，將洗滌量調為(wei) 高，最好是比包被體(ti) 積更高。太少的洗滌液會(hui) 讓一部分分析表麵洗滌不到，從(cong) 而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。

       我們(men) 建議使用350µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個(ge) 反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體(ti) 或抗原量就越少。

洗滌次數

       影響洗滌效果的主要參數是洗滌循環的量。當然，洗滌次數越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會(hui) 降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體(ti) 或抗原孵育後重複洗滌三次。不過，一般而言，包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對於(yu) 用戶包被的ELISA板，必須優(you) 化洗滌次數。

      控製洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個(ge) 孔能容納330至460 µl。不過，有些自動化洗板機可設置程序，分配遠遠超出這個(ge) 量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其實很簡單，就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體(ti) ，抽吸器也將液體(ti) 吸出。這種技術能增加洗滌量，但不會(hui) 溢出到其他孔中。

抽  吸

      還有一些參數會(hui) 影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置，這兩(liang) 者都能調整，以降低背景（殘留量）和差異。

      殘留液體(ti) 中包含未結合的抗原或抗體(ti) ，它們(men) 會(hui) 增加背景信號。殘留量越小，殘留液體(ti) 越少，轉移到下一步的幹擾液體(ti) 也就越少。

      吸液高度會(hui) 明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與(yu) 反應孔底部的距離稍大，那就會(hui) 讓殘留量急劇增加。反之，如果洗滌吸頭壓著反應孔底部，那麽(me) 也會(hui) 使吸液效率降低，殘留量增加。

      目前的洗板機一般使用兩(liang) 種類型的洗頭：剛性和浮動。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動，而剛性洗頭則固定在適當的位置。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(you) 化起來更為(wei) 複雜，因為(wei) 你需要非常仔細地調整吸液高度。如果你們(men) 實驗室使用幾種不同的板，那可能會(hui) 很耗時。在使用浮動洗頭時，吸頭會(hui) 降到反應孔的底部。調整高度就不是很重要，因此洗頭會(hui) 下降到底部。

抽吸的位置也對殘留量有著重要影響；如果每個(ge) 孔隻使用一個(ge) 抽吸點（這很常見，因為(wei) 更快），那麽(me) 抽吸的位置需要優(you) 化。最佳的位置取決(jue) 於(yu) 洗頭的性狀，但它幾乎不在反應孔的中間，即使這是所有洗頭最常見的默認位置。一般來說，最佳位置在孔中間與(yu) 孔壁之間的某處。

反應孔的形狀也會(hui) 影響殘留量。C形底（平底圓角）的微孔板一般會(hui) 比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。

洗板時還應注意

1.  需每天校正注液量及殘液量，洗滌後殘液量不得大於(yu) 2 μl。

2.  及時更換破損吸液針，避免破壞底板包被。

3.  針對不同廠家酶標板注意調整吸液頭下降高度，避免衝(chong) 洗針頭卡住酶標板。

4.  注意調整洗液量，洗液量過多將溢出，過少將達不到洗滌效果。

5.  關(guan) 機前使用蒸餾水衝(chong) 洗管道，避免洗液的結晶物堵塞管道。

4.  不同種試劑盒的洗液嚴(yan) 禁混合使用。

為(wei) 了洗滌效果較好，實驗室可采用機器與(yu) 人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌後再進行人工洗板1～2次，能達到理想的洗滌效果。ELISA看起來很簡單，但是在實際操作過程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yan) 謹規範的實驗操作，高品質的試劑盒與(yu) 專(zhuan) 業(ye) 的技術團隊也是獲得準確結果的保證！