實時熒光PCR試劑盒針對的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體係中含基因組模板的情況下，PCR反應得以進行並釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。
樣本要求：
1.適用標本類型：發病動物血液、空腸及小腸腸內容物及組織髒器(腸道組織、腸係膜及淋巴結等)和病毒培養液。
2.標本采集，方法如下：
(1)血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉至5ml的幹燥管中，密閉送檢。
(2)腸內容物：無菌條件下取腸道內容物約1g左右，置入1ml含有1.0mlPBS(或生理鹽水)的5ml離心管中，立即送檢。
(3)組織髒器：取發病動物腸道組織及腸係膜淋巴結等組織約1g，置一1.5ml的潔淨離心管中，密閉送檢。
3.應避免標本間交叉汙染。
4.標本收集後可立即檢測；若不能立即檢測，可置於2～8℃冷藏保存；如需長期保存，標本應凍存於-80℃以下，避免反複凍融。
實時熒光PCR試劑盒注意事項：
1、整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物安全櫃，樣本處理在生物安全櫃中進行操作；三個區應該配有紫外線殺菌裝置。
2、為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗後立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3、每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4、試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，並應瞬時離心。
5、試劑盒內所配陰性和陽性對照在次使用前應全部轉移至標本準備區，並單獨存放。
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