淺析進口hth体育下载地址實驗操作四大注意事項

　　一、ELISA操作前準備工作

　　進口hth体育下载地址的選擇

　　ELISA操作前，應做好實驗的設計、選擇適合自己檢測範圍和靈敏度的進口hth体育下载地址、提前訂購和準備試劑及耗材、處理樣本等準備工作。

　　樣本處理

　　在收集標本前需有一個完整的計劃，需要清楚要檢測的成份是否足夠穩定。ELISA檢測提倡新鮮標本盡早檢測，對收集後當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，請取材後，將標本及時分裝後放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質量，所以避免反複凍融。

　　二、ELISA標準品溶解

　　標準品是進口hth体育下载地址的檢測抗原的一個度量標尺，因此標準品的溶解、倍比稀釋和保存要特別注意以下細節：凍幹標準品溶解按照說明書的要求，準確複溶。在冰上操作標準品為佳，靜止5－0分鍾，輕輕搖勻後按照一次量分裝，在-20度或-70度保存。標準品嚴禁反複凍融。標準品的倍比稀釋應事先做好準備，如離心管的準備和編號以及稀釋液的準備；稀釋時，應充分混勻；采用進口或者矽化的EP管，減少蛋白吸附。在實驗孔內進行倍比稀釋時，注意操作規範，槍頭勿刮劃預包被的孔底。

　　三、ELISA操作中的洗滌

　　洗滌是ELISA實驗中是多次數的操作，也是非常重要的步驟。不嚴格的洗滌容易出現洗不幹淨或交叉汙染現象，實驗重複效果差的現象。不管用多道加樣器、洗瓶、吸管，還是洗板機，嚴格按照說明書操作不要減少步驟洗滌的洗滌體積、洗滌時間和洗滌次數。注意標準化操作將減少實驗誤差和不同實驗之間的誤差。操作者常出現洗板不幹淨現象，請比照“手工洗板小貼士”操作：

　　a)洗液不要溢出孔外，以免汙染相鄰的孔，特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度的孔汙染了低濃度的孔或空白孔，其造成的交叉汙染的孔是洗不掉的，背景肯定會增高。

　　b)特別注意：設計實驗的時候要考慮實驗孔的位置，保證甩掉洗液時，空白孔、低濃度孔或陰性對照組在上麵或一側或分開較好。同時注意甩掉洗液的動作翻轉（從正上方旋轉20－50度）要迅速、幹脆。甩板不要手腕左右搖擺、旋轉來甩液體！甩出後以直線方式補2－3次甩出液體。

　　c)用幹淨的濾紙，不要用衛生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導致洗板不幹淨，結果偏高或偏低，重複孔的數值也會相差很大。

　　d)每次拍板不要重複在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟；拍板不宜過輕，否則拍不幹淨，拍板很用力不會對蛋白有什麽影響。但注意不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板後輕叩幾下，後一次一定要扣幹淨。

　　e)不能減少洗液體積、洗板時間和次數。洗板時間太短，洗板效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數可以使背景更幹淨。

　　四、ELISA的標準曲線如何擬合？

　　一般情況按照說明書方法擬合標準曲線。標準曲線可以由酶標儀附帶軟件自動生成，也可手動製作。標準曲線呈“S”形曲線，兩端趨於水平，中間趨於線性，中間部分為較佳的檢測範圍。當標準品的量超過與包被抗體結合的量，此時標準品已飽和，再增加標準品的量，其OD值不再變化，故當標準品達到一定濃度後，曲線就趨於水平。一般廠商給出的濃度範圍落在中間線性範圍，根據標準曲線，可以測出樣本的濃度。按照科學分析方法，如果存在“奇異點”或者“汙點”，直接采用線性分析不是很好，要對擬合標準曲線的幾個點進行取舍，同時也可改用雙對數直線擬合或者四因素曲線擬合。