國產(chan) hth体育下载地址實驗測定中,存在眾(zhong) 多的幹擾因素及影響實驗結果的判斷,這給實驗者在一定程度上帶來了的困擾,今天小編在這裏為(wei) 大家分析下ELISA實驗過程中內(nei) 源性的幹擾因素。內(nei) 源性幹擾因素一般包括類風濕因子、補體(ti) 、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體(ti) 、某些自身抗體(ti) 、因使用鼠抗體(ti) 治療或診斷誘導的抗鼠Ig抗體(ti) 、交叉反應物質等。在日常的臨(lin) 床血清(漿)標本中,有相當比例不同程度的含有上述各種幹擾物質,從(cong) 而導致測定結果的假陽性。
類風濕因子(rheumatoid factors,RF)在類風濕患者、其他疾病以及正常人血清中,常含有較高或不同濃度的RF,RF一般為(wei) TgM型,亦有IgG和IgA型,RF具有與(yu) 變性IgG產(chan) 生非特異結合的特點,因為(wei) 在elisa測定中,其可與(yu) 固相上包被的特異抗體(ti) IgG以及隨後加入的酶標的特異抗體(ti) IgG結合,從(cong) 而出現假陽性結果。尤其是在捕獲法IgM型特異抗體(ti) 的測定中表現zui為(wei) 明顯,因為(wei) 此時固相包被的抗體(ti) 為(wei) 抗人弘鏈抗體(ti) ,IgM型RF的存在可使其大量結合於(yu) 固相。為(wei) 避免RF對ELISA測定的幹擾,通常可以采取下述措施:
、稀釋標本:這在判斷急性病原體(ti) 感染的特異IgM抗體(ti) 如抗HAVIgM,抗HBclgM, TORCH的IgM抗體(ti) 檢驗等尤為(wei) 有用。因為(wei) 急性感染時,血循環中特異的IgM抗體(ti) 滴度通常很高,而RF滴度通常相對要低得多。因此,在測定前對標本進行稀釋,特異的IgM因高滴度存在仍可檢出,而非特異的RF則會(hui) 因為(wei) 稀釋變成非常低的滴度,從(cong) 而對測定幾乎不產(chan) 生幹擾。現在,有些特異IgM檢測elisa試劑盒不要求稀釋標本,直接檢測,這樣雖然方便了實驗室技術人員的操作,但容易出現假陽性結果,並且由於(yu) 某些慢性感染,如HBV的感染,血循環中抗HBelgM可持續以一定的滴度存在,標本不做稀釋即進行檢測,即可出現陽性結果,從(cong) 而失去抗HBclgM用於(yu) HBV急性感染的診斷價(jia) 值。因此,在臨(lin) 床實驗室,一定要使用要求對標本做:000稀釋的試劑盒進行檢驗,從(cong) 而保證相應檢測項目結果的可靠性及臨(lin) 床應用價(jia) 值。
2、改變酶標抗體(ti) :由於(yu) RF結合的是IgG的Fc片段,如果將待酶標的抗體(ti) 的F,片段酶切夫除,僅(jin) 留下具有特異結合功能的F(ab’)2部分標記酶,則在測定中即可避免RF的幹擾。
3、標本中RF用變性IgG預先封閉:將經熱變性(63℃,0min)的動物如兔、羊等的IgG加入到標本稀釋液中,或是將該變性IgG連接至一顆粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然後加入臨(lin) 床血清標本,反應後,再吸出標本進行檢測。此外,在測定特異IgM時,也可使用抗人IgG去除臨(lin) 床標本中RF和IgG。
4、國產(chan) hth体育下载地址測定抗原時,可在標本中加入可使RF降解的還原劑:如2—巰基乙醇。2—巰基乙醇等還原劑可使抗體(ti) 內(nei) 的巰基裂解,因而可以去除RF的幹擾,但隻適用於(yu) 抗原測定。
5、包被或酶標二抗使用特異的雞抗體(ti) IgY:RF不與(yu) 雞IgY反應,如果包被和酶標二抗均為(wei) 雞IgY抗體(ti) ,則不受標本中RF的幹擾。
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