蛋白質與國產hth体育下载地址相互作用的研究

國產(chan) hth体育下载地址與(yu) 蛋白質是生命活動的執行者，細胞內(nei) 的生理變化都是通過蛋白質來實現的。但是生命活動中各項功能和行為(wei) 不是由單一的蛋白質來完成的，需要蛋白質與(yu) 蛋白質，蛋白質與(yu) 核酸之間的相互作用來實現的。蛋白-蛋白互作網絡與(yu) 轉錄調控網絡對調控細胞及其信號有重要意義(yi) 。於(yu) 是對於(yu) 蛋白之間相互作用的研究也變的很重要，關(guan) 於(yu) 研究方法也是層出不窮。
 
在我們(men) 實驗研究的過程中主要用到以下幾種技術：
.酵母雙雜交（Y2H）
2.Pull-down技術
3.免疫共沉澱技術（Co-IP）
4.亞(ya) 細胞共定位技術
5.噬菌體(ti) 展示技術（PDT）
6.熒光共振能量轉移技術（FRET）
7.雙分子熒光互補技術（BIFC）

其中實驗室比較常用的研究方法主要是前三種。這裏對酵母雙雜交技術略作介紹和評述。

原理：
酵母雙雜交係統由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的轉錄激活因子GL4有兩(liang) 個(ge) 獨立的結構域 ：N末端的DNA結合域（BD）和C末端的轉錄激活域（AD）。BD與(yu) DNA分子結合，AD激活下遊基因的轉錄，國產(chan) hth体育下载地址隻有兩(liang) 者在空間上充分接近才能激活下遊基因的轉錄。於(yu) 是將要研究的兩(liang) 個(ge) 蛋白分別與(yu) BD和AD融合，如果兩(liang) 個(ge) 蛋白有相互作用則AD和BD在空間上會(hui) 接近進而激活下遊報告基因的轉錄。

操作步驟：
（）首先構建已知蛋白的cDNA序列為(wei) 誘餌，與(yu) DNA結合域融合（2）將待篩選的蛋白的cDNA序列與(yu) 轉錄激活域融合，構建成文庫質粒（3）將這兩(liang) 個(ge) 質粒共轉化到酵母細胞中（4）通過檢測下遊報告基因的表達篩選或確認蛋白相互作用。

優(you) 缺點：
優(you) 點：是可以在文庫中可以高通量篩選與(yu) 目的蛋白相互作用的蛋白缺點：是假陽性多，還需要其他方法相互印證，國產(chan) hth体育下载地址不適用於(yu) 所有的蛋白