hth体育下载地址檢測結果準確的方法
血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會(hui) 釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為(wei) 標記的ELISA測定中,溶血標本可能會(hui) 增加非特異性顯色。
的試劑,良好的儀(yi) 器和正確的操作是保證hth体育下载地址檢測結果準確可靠的必要條件。
hth体育下载地址的操作因固相載體(ti) 的形成不同而有所差異,國內(nei) 醫學檢驗一般均用板式點。 本文將敘述板式ELISA各個(ge) 操作步驟的注意要點,ELISA檢測試劑盒珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與(yu) 特殊儀(yi) 器配合應用,嚴(yan) 格遵照規定操作,必能得出準確的結果。
可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體(ti) 液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體(ti) 或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清 、尿液),有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為(wei) 標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等於(yu) 血清。製備血漿標本需借助於(yu) 抗凝劑,而血清標本隻要待血清自然凝固、。除特殊情況外,在醫學檢驗中均以血清作為(wei) 檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌汙染,ELISA檢測試劑盒菌體(ti) 中可能含有內(nei) 源性HRP,也會(hui) 產(chan) 生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA檢測試劑盒中可使本底加深。
一般說來,在5天內(nei) 測定的血清標本可放置於(yu) 4℃,ELISA檢測試劑盒超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清
融解後,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾,澄清後再檢測。反複凍融會(hui) 使抗體(ti) 效價(jia) 跌落,所以測抗體(ti) 的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑(見3.2.4)。
按試劑盒說明書(shu) 的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾 水或去離子水,包括用於(yu) 洗滌的,應為(wei) 新鮮的和高質量的。自配的緩衝(chong) 液應用pH計測量較正。從(cong) 冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與(yu) 室溫平衡後使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。hth体育下载地址每次加標本應更換吸嘴,以發生交叉汙染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管 中按規定的稀釋度稀釋後再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標本,然後在微型震蕩器上震蕩分鍾以保證混和。加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在hth体育下载地址板孔的底部,避免加在孔壁上部,並注意不可濺出,不可產(chan) 生氣泡。
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