卵清蛋白分離提取原理與目的

卵清蛋白分離提取原理與(yu) 目的

一、實驗目的與(yu) 原理
雞卵粘蛋白存在於(yu) 雞蛋清中，對有強烈的抑製作用，高純度的雞卵粘蛋白抑製的分子酶的分子比為(wei) :。雞卵粘蛋白在中性或酸性溶液中對熱和高濃度的脲都是相當穩定的，而在堿性溶液中較不穩定。
由於(yu) 雞卵粘蛋白對有強烈的抑製作用，因此可以用雞卵粘蛋白做親(qin) 和配基配製純化的親(qin) 和材料。

二、材料與(yu) 試劑：
．材料：新鮮雞蛋2隻
2：儀(yi) 器：抽濾瓶500－000ml、燒結漏鬥、移液器、磁力攪拌器
3：試劑：
0％TCA，用固體(ti) NaOH調調PH至.05－.0，需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、液、BAEE-0.05M，PH8.0Tris-HCL緩衝(chong) 液（每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2），50ml 
pH8.0,0.M Tris-HCL緩衝(chong) 液

三、操作步驟
，取兩(liang) 隻新鮮雞蛋，得蛋清50ml，置於(yu) 燒杯中，外用溫水浴25℃－30℃，在不斷攪拌條件下，緩慢加入等體(ti) 積得三氯乙酸－丙酮（:2V/V），立即出現大量白色絮狀沉澱，加完後zui終PH約3.5，再繼續攪拌30min，然後在4℃冰箱中放置過夜。
2,次日用布氏漏鬥抽濾，得黃綠色清液。
3，邊攪拌邊加入4℃預冷的丙酮200ml沉澱蛋白，在4℃放置2h之後將上清液小心倒入瓶中回收，下部沉澱部分於(yu) 4000rpm離心5min，收集沉澱。
4，將沉澱溶於(yu) 0ml無離子水中，對無離子水（50倍）透析4h，換水兩(liang) 次，再對碳酸鈉緩衝(chong) 液透析過夜，4000rpm離心0min ,去除不溶物。