植物吲哚-3丁酸（IBA）試劑盒說明書

植物吲哚-3丁酸（IBA）試劑盒說明書(shu)

本試劑僅(jin) 供研究使用

試驗原理：
植物吲哚-3丁酸IBA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IBA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nei) 進行檢測。先將IBA和標記的抗體(ti) 同時溫育。洗滌後，加入親(qin) 和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chan) 生顏色。顏色的深淺和樣品中IBA的濃度呈比例關(guan) 係。

操作注意事項
． 試劑應按標簽說明書(shu) 儲(chu) 存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟(diu) 棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍幹，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書(shu) 中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

植物吲哚-3丁酸IBA試劑的準備
． 標準品：標準品的係列稀釋應在實驗時準備，不能儲(chu) 存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
400 ng/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200 ng/ml （5號標準品） 00ul的原倍標準品加入00ul的標準品稀釋液
00 ng/ml （4號標準品） 00ul的5號標準品加入00ul的標準品稀釋液
50 ng/ml （3號標準品） 00ul的4號標準品加入00ul的標準品稀釋液
25 ng/ml （2號標準品） 00ul的3號標準品加入00ul的標準品稀釋液
2.5 ng/ml （號標準品） 00ul的2號標準品加入00ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩衝(chong) 液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chan) 生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液：稀釋後加入50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。
3． 加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的標記的抗體(ti) 。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育小時。
4． 甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5． 每孔加入60ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。
6． 甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育0分鍾。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

植物吲哚-3丁酸IBA試劑盒性能
. 靈敏度：zui小的檢測濃度小於(yu) 號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數R值為(wei) 0.990。
2. 特異性：不與(yu) 其它細胞因子反應。
3. 重複性：板內(nei) 、板間變異係數均小於(yu) 0%。

結 果 判 斷 與(yu) 分 析
、儀(yi) 器值：於(yu) 波長450nm的酶標儀(yi) 上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為(wei) 縱坐標（Y），相應的IBA標準品濃度為(wei) 橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的IBA含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值範圍：0-400ng/ml

4、敏感度： .0 ng/ml