穀研試劑-ELISA捕獲法檢測乙型腦炎病毒IgM

實驗原理

用elisa試劑盒抗人μ鏈包被微孔板，以捕獲待檢血清中IgM，加入乙腦病毒抗原與(yu) 其特異性IgM結合，再用酶標抗乙腦病毒抗體(ti) 與(yu) 抗原結合，加底物顯色。

主要試劑與(yu) 器材

.病毒抗原的製備與(yu) 純化：用乙腦病毒高毒株接種乳鼠或幼鼠，瀕死前取腦組織，pH9.0硼酸緩衝(chong) 液配成0%懸液。0000rpm離心30min，取上清液，按-3mg/ml加，置4℃2h6000rpm，將沉澱物加入原病毒懸液/20體(ti) 積的離散劑STE緩衝(chong) 液（EDTA 0.029g，NaCl 0.75g，0.05mol/L pH9.0Tris-HCl00ml）充分碾磨，置4℃2h。高速離心，取上清液，按:5000終濃度加入NaN3，用前進行方陣滴定。對照抗原用正常鼠腦同法製備。

2.elisa試劑盒中抗血清吸收：用乙腦病毒株免疫鼠，製備高價(jia) 免疫血清。每毫升血清加鼠腦幹粉0.g，新鮮補體(ti) 00μl，時時振搖。4℃2h，再置37℃水浴中h（不斷振搖）。高速離心，取上清液，以吸收組織抗體(ti) 。

3.抗血清純化：將份血清加份生理鹽水，在攪拌下滴加2份飽和硫酸銨溶液，於(yu) 4℃靜置2h後，2000rpm離心20min，吸棄上清液，重複上述2-3次。

4.酶標鼠抗乙腦病毒IgG抗體(ti) ：將上述提純的抗體(ti) IgG組分，用辣根過氧化物酶以過碘酸鈉法進行標記。

5.其他：抗人μ鏈單抗、待檢血清或腦脊液、底物溶液（TWB-H2O2）、終止液（2mol/L H2SO4）等。

操作步驟

.包被抗人μ鏈單抗：用經適當稀釋的抗人μ鏈單克隆抗體(ti) 包被微孔，每孔00μl，37℃h後4℃2h，洗3次。

2.加樣：用含4%羊血清的PBS-T稀釋待檢血清，作:0和:00兩(liang) 個(ge) 稀釋度。每孔00μl，37℃3h，洗3次。

3.加抗原：用含4%羊血清的PBS-T稀釋抗原，每孔00μl。37℃2h後4℃2h，洗3次。

4.加酶標抗體(ti) ：用含0%羊血清的PBS-T稀釋酶標豚鼠抗乙腦病毒抗體(ti) ，每孔加00μl。37℃2h，洗4次。

5.加底物：加TMB-H2O2底物溶液，每孔00μl，室溫20-30min。

6.終止反應：加2mol/L H2SO4，每孔50μl，終止反應。

結果分析

用酶標儀(yi) 測450nm波長吸光度。P/N≥2.為(wei) 陽性。