本試劑盒采用雙抗體(ti) 兩(liang) 步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預
先包被人胎球蛋白 A(FETU-A)多克隆抗體(ti) 透明酶標包被板中，溫育足夠時間後，洗滌除去未
結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物
A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為(wei) 藍色產(chan) 物，在酸的作用下變成
黃色，顏色的深淺與(yu) 樣品中人胎球蛋白 A(FETU-A)濃度呈正相關(guan) ，450nm 波長下測定 OD 值 ，
根據標準品和樣品的 OD 值，計算樣本中人胎球蛋白 A(FETU-A)含量。
試劑盒組成
酶標包被板 2 孔×4 條 7 底物夜 A 3mL
2 標準品： 00ug/ml 0.6mL 8 底物夜 B 3mL
3 20 倍濃縮洗滌液 20mL 9 終止液 3mL
4 標準品稀釋液 3mL 0 說明書(shu) 份
5 樣本稀釋液 3mL 封板膜 張
6 酶標試劑 3mL 2 密封袋 個(ge)
備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為(wei) ：00、50、25、2.5、6.25、3.2ug/ml
操作步驟
、準備：從(cong) 冰箱取出試劑盒，室溫複溫平衡 30 分鍾。
2、配液：用蒸餾水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定於(yu) 框架上，分別設置標準品孔 、
待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品 50μL；待測樣本孔中先
2
加入待測樣本 0μL，再加樣本稀釋液 40μL（即樣本稀釋 5 倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。
5、洗板：棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置 min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍幹，如此重複洗板 4 次（也可用洗板機按說明書(shu) 操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液 50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重複 4 的操作。
8、洗板：重複 5 的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑 A 液 50μL，再加入顯色劑 B 液 50μL，37℃避光顯色 5min。
0、終止：取出酶標板，每孔加終止液 50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
、測定：以空白孔調零，在終止後 5 分鍾內(nei) ，用 450nm 波長測量各孔的吸光值（OD 值）。
2、計算：根據標準品的濃度及對應的 OD 值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣
本的 OD 值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃
度為(wei) 實際測定濃度乘以稀釋倍數。
樣本要求
、樣本不能含疊氮鈉（NaN 3 ），因為(wei) 疊氮鈉（NaN 3 ）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑製劑。
2、標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能立即
試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
注意事項
、實驗嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準。
2、酶標包被板開封後如未用完，應立即裝入密封袋中加幹燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋 5 倍，計算結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量範圍為(wei) 3.2-00ug/ml ，超過此範圍，為(wei) 標準曲線延伸計算所得，不做為(wei) 準
確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋後測定準確結果（ 3.2-00ug/ml 範圍內(nei) ），乘以總稀釋倍數
即為(wei) 樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、為(wei) 避免交叉汙染，標準品、樣本和空白對照每加一個(ge) 就要更換一次吸頭；酶標工作液 、
樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重複使用封板膜。
8、試劑盒保質期內(nei) 使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物 B 對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。