豬C反應蛋白(CRP)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 試劑盒該試劑盒以 HRP 標記的鏈黴親(qin) 和素複合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）為(wei) 基礎，可用於(yu) 檢測細胞、組織內(nei) 的特異性 CD68 抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強定性定位準確、背景清晰。在所用的 CD68 一抗與(yu) 相應靶抗原結合後，用生物化二抗與(yu) 一抗特異性結合，zui後加入 HRP-SA，形成抗原—特異一抗—化二抗—HRP-SA 複合物，顯微鏡下觀察成像。

豬C反應蛋白(CRP)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 試劑盒所含試劑：
試劑 A 通透液：0.% Triton-X 00    0 mL（選用）
試劑 B 封閉緩衝(chong) 液（封閉用） 20 mL
試劑 C （*分裝）已稀釋的即用型 CD68 一抗（2.5ml）
試劑 D （*分裝）化羊抗兔 IgG 支
（濃度 .5 mg/mL，稀釋比為(wei) :300~:500）50 μL+抗體(ti) 稀釋液 20ml
試劑 E HRP-SA 複合物 支（濃度 μM，稀釋比 :50~:200）00 μL
試劑 F DAB 顯色液 5ml
用戶自備試劑：
． 0mM TBS（pH7.2~7.4）
三羥基氨基甲烷 .2g
氯化鈉 7.6g
加蒸餾水 800mL，濃鹽酸調 pH 值至 7.2~7.4，zui後定容至 000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體(ti) 積比）
2．抗原修複液（依檢測抗原不同而選擇不同的修複液）
0mM pH6.0 檸檬酸緩衝(chong) 液
檸檬酸 0.38g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調 pH 值至 6.0，zui後定容至 000mL
或：0.5M EDTA 修複液（pH8.0）
EDTA·2H2O 86.g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 700mL，用 0mM NaOH 調 pH 值至 8.0，zui後定容至 000Ml
3.緩衝(chong) 甘油封固劑 0 mL4.Tween 20 5 mL
石蠟包埋組織切片免疫染色
實驗步驟（建議方案）：
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
.烤片： 將待做切片置於(yu) 切片架上，於(yu) 60℃恒溫烤箱中至少烤 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次0 min；
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水衝(chong) 洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修複： 根據抗體(ti) 說明書(shu) 方法進行抗原修複，常采用高壓、微波（溫度達到 98~00℃）或酶消化修複法，室溫自然冷卻，自來水衝(chong) 洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體(ti) 修複方法見附 ）* 注：有些抗原勿需修複，直接進入第 5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 0 min；
9.加二抗： 滴加用抗體(ti) 稀釋液稀釋的化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育30 min；0.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
2.加 HRP-SA： 滴加用抗體(ti) 稀釋液稀釋的試劑 E（：50~200，終濃度 5~20 nM），37℃濕盒中孵育 30 min；
3.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
4.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
5.複染：自來水充分衝(chong) 洗，複染，脫水，透明；
6.封片： 待組織標本幹後，用試劑緩衝(chong) 甘油封固劑封片；
7.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
豬C反應蛋白(CRP)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 注意事項：
.修複後緩衝(chong) 液須自然冷卻，自來水衝(chong) 洗後方能把切片取出，驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。
2.緩衝(chong) 液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩衝(chong) 液不能反複使用。
3.若試劑為(wei) 微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nei) 蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4.封片前一定要換用 TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的 Tween 20，否則會(hui) 影響結果觀察。
5.如須複染細胞核，則在封片前複染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。
附 ：
豬C反應蛋白(CRP)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 抗原修複方法
常用抗原修複液：檸檬酸緩衝(chong) 液（0.0M pH6.0）、EDTA 抗原修複液（pH8.0 或9.0）等等。
一、酶消化修複法
切片脫蠟水化處理，TBS 衝(chong) 洗，在組織上滴加或，37℃孵育20~30min 後 TBS 衝(chong) 洗即可。
二、微波抗原修複法微波盒中加入抗原修複液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化後的切片置於(yu) 耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩衝(chong) 液中，中檔或繼續微波 0~5min，取出微波盒冷卻至室溫後，自來水衝(chong) 洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調整。
三、直接高壓抗原修複法
取修複液於(yu) 不鏽鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置於(yu) 耐高溫切片架上，修複液沸騰後放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣後計時 .5~2.5min 即可脫離熱源，自然冷卻至室溫後自來水衝(chong) 洗，取出切片。此方法適用於(yu) 較難檢測或核抗原的修複。
四、隔水式高壓抗原修複法不鏽鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修複液於(yu) 微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣後計時4~8 min 即可關(guan) 閉熱源，自然冷卻至室溫後自來水衝(chong) 洗，取出切片。此方法適用於(yu) 較難檢測或核抗原的修複。